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哺乳動物 DNA 的快速分離2021/12/17
原理根據本方案制備的哺乳動物DNA約20~50kb，適于作PCR反應的模板。DNA產量在0.5到3.0μg/mg組織之間變化，或者是5~15μg/300μl全血。材料與儀器無DNase的RNase蛋白...
哺乳動物細胞抽提物中熒光素酶的測定實驗2021/12/16
原理螢光素酶是理想的報告基因，因為哺乳動物細胞中不含內源性螢光素酶，一旦轉錄完成立刻就生成功能性的螢光素酶，同時在所有的化學發(fā)光反應中，它的光產物具有最高的量子效率，檢測靈敏度高。熒光素酶報告基因被廣...
薄層層析法測定氯霉素酰基轉移酶含量實驗2021/12/16
材料與儀器用攜帶感興趣DNA的pCAT載體轉染的哺乳動物培養(yǎng)細胞CAT反應混合物1乙基乙酸裂解緩沖液不含鈣鹽和鎂鹽的磷酸鹽緩沖液薄層層析（TLC)溶劑Tris-Cl放射性墨水干冰乙醇浴不溶于乙醇的墨水...
BAL31 核酸酶消化法產生雙向缺失突變體實驗2021/12/16
材料與儀器BAL31緩沖液EGTA乙醇酚氯仿醋酸鈉蔗糖凝膠上樣緩沖液TE噬菌體T4DNA聚合酶BAL31核酸酶大腸桿菌DNA聚合酶IKlenow片段限制性內切酶瓊脂糖凝膠用于凝膠電泳的DNA分子量標準...
人生長激素的放射免疫分析法2021/12/16
材料與儀器hGH表達質粒洗滌液親和素包被珠試管γ計數儀步驟1.取轉染了hGH表達質粒的哺乳動物細胞的培養(yǎng)液100~500μl。2.加100μl培養(yǎng)液或標準品至12mm×75mm圓底試管中。加入100μ...
CAT活性的相-抽提分析法2021/12/16
材料與儀器轉染細胞氯霉素Tris·ClTMPD二甲苯離心機離心管培養(yǎng)箱步驟一、來源于哺乳動物細胞1.按“CAT活性的層析分析法”中的步驟1~5的凍融法，制備哺乳動物細胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制細...
含甲酰胺的測序膠2021/12/15
原理聚丙烯酰胺凝膠加人甲酰胺可以使造成條帶壓縮的測序產物的二級結構不穩(wěn)定。材料與儀器DNA甲酰胺甲醇乙醇TEMEDSDS電泳儀步驟1.按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。2.按所需濃度配制甲酰胺凝膠...
電解質梯度測序膠 簡介2021/12/15
原理通過簡單地提高下槽緩沖液的鹽濃度，使凝膠底部的離子強度得以提高，在電泳過程中，鹽離子可以電泳進入凝膠并產生重復性好的及有效的梯度。材料與儀器DNATBE乙酸鈉電泳儀步驟1.按基本方案步驟1~22灌...
變性聚丙烯酰胺凝膠的制備實驗2021/12/15
材料與儀器丙烯酰胺溶液過硫酸銨水溶液去離子水去污劑乙醇KOH甲醇溶液聚硅氧烷溶液TBE電泳緩沖液TEMED尿素彈簧夾干膠架封膠帶膠板（配對的）和隔板手套凡士林保護性的工作合紙鯊魚齒梳子有臂的燒瓶隔板注...
原位裂解細胞的CAT分析法2021/12/15
材料與儀器轉染細胞Triton裂解液培養(yǎng)皿培養(yǎng)箱步驟1.60mm培養(yǎng)皿中轉染了CAT表達質粒的細胞，用2mlPBS洗1次。每培養(yǎng)皿加入2ml低滲緩沖液，在室溫下溫育2~5min。2.吸去低滲緩沖液，加...
緩沖液梯度測序膠2021/12/15
原理在本實驗方案，測序膠底部的緩沖液濃度大于其頂部濃度，使得短寡核苷酸片段（膠底部）的遷移率相對比長寡核苷酸（頂部）的遷移率要慢一些，這洋凝膠可電泳更長的時間而不至于短核苷醆從底部走失并改善了長核苷酸...
CAT活性的層析分析法2021/12/14
材料與儀器DNAPBS乙酸乙酯氯仿甲醇Tris·Cl薄層層析缸濾紙離心管離心機步驟1.100mm培養(yǎng)皿中的轉染了CAT表達質粒的貼壁細胞，用PBS洗兩次，每次5ml每培養(yǎng)皿加入1mlTEN溶液。將細胞...
哺乳動物細胞基因穩(wěn)定轉染的實驗2021/12/14
材料與儀器哺乳動物細胞*培養(yǎng)液培養(yǎng)箱離心管步驟1.確定所要轉染的細胞系能呈獨立集落生長。對于貼壁細胞，在10cm組織培養(yǎng)培養(yǎng)皿中接種約100個細胞，培養(yǎng)10~12天，毎4天換液1次。亞甲藍染色后對成活...
變性凝膠電泳實驗2021/12/14
材料與儀器DNA乙醇異丙醇二甲基二氯硅烷TEMED變性丙烯酰胺溶液SDS電泳儀注射器巴斯德吸管干膠機步驟1.制作每塊凝膠時，首先要用肥皂及水小心嚴格地清洗兩塊30cm×40cm的前后玻璃平...
哺乳動物中制備基因組 DNA 實驗2021/12/14
材料與儀器動物組織PBS乙酸銨乙醇酚氯仿異戊醇TE離心機搖床研缽步驟1.切下組織并立即剪成小塊，置于液氮中凍結。2.將200mg~1g的組織用預冷的研缽和研杵研碎，或用錘子將其搗為細粉末，每100mg...
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