本試劑盒用于無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 的大量制備，柱上去除內(nèi)毒素，操作簡(jiǎn)單。菌體經(jīng)改良的堿裂解處理，質(zhì)?？蓮木w中釋放出來(lái)，并特異、高效地被離心柱硅膠膜吸附。通過(guò)去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他雜質(zhì)，最后得到高純度的無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA，所得質(zhì)粒可直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、PCR、測(cè)序、細(xì)胞轉(zhuǎn)染等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
彩色無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒 核酸提取

EndoFree Plasmid Maxi Kit

彩色無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒

彩色無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒 核酸提取

目錄號(hào)：31115-10

產(chǎn)品內(nèi)容：

保存條件：

在室溫(15 ~ 25℃)干燥條件下，可保存 12 個(gè)月。

RNase  A，可常溫運(yùn)輸，-20℃保存。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒用于無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 的大量制備，柱上去除內(nèi)毒素，操作簡(jiǎn)單。菌體經(jīng)改良的堿裂解處理，質(zhì)?？蓮木w中釋放出來(lái)，并特異、高效地被離心柱硅膠膜吸附。通過(guò)去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他雜質(zhì)，最后得到高純度的無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA，所得質(zhì)?？芍苯佑糜诿盖?、轉(zhuǎn)化、PCR、測(cè)序、細(xì)胞轉(zhuǎn)染等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

小質(zhì)粒（<10kb），拷貝數(shù)高，100ml 菌液通常能提到 500-1500ug 質(zhì)粒；大質(zhì)粒（>10kb），拷貝數(shù)低，200ml 菌液通常能提到 200-600ug 質(zhì)粒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. du特工藝配方清除內(nèi)毒素，內(nèi)毒素含量極低（< 1 EU/ug DNA），細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果ji佳。

2. 得率高： 150 – 300 ml 菌液可提出多達(dá) 500– 2000 ug 的純凈質(zhì)粒；

重要提示：

一、使用前檢查 Solution II 和 Solution N3 是否出現(xiàn)沉淀，如有沉淀 37℃加熱溶解后再用。

二、shou次使用前，請(qǐng)先在 Buffer WB2 中加入無(wú)水乙醇（詳見瓶身標(biāo)簽），混勻，并做好標(biāo)記。

三、shou次使用請(qǐng)先將 RNase A 全部加到 Solution I 中，混勻，每次使用后置于 2 ~ 8℃保存。

操作步驟：

1. 柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 2.5 ml 的Buffer BL，10,000 rpm 離心 2 min，棄收集管中濾液，將吸附柱重新放回收集管中。

2. 取 100 ~ 150 ml（最多 200 ml）過(guò)夜培養(yǎng)的菌液，室溫 10,000 rpm 離心 2 min，棄上清，收集菌體。

（注意： 如果菌液濃度高，收集 100ml 的菌體即可,菌液濃度低，收集 150-200ml 菌液。）

3. 加入 10 ml Solution I，重懸菌體沉淀，渦旋震蕩至che底懸浮，呈現(xiàn)出均勻渾濁的棕紅色。

（注意：如有未che底懸浮的菌塊會(huì)影響裂解，導(dǎo)致提取的質(zhì)粒濃度及純度降低）

4. 加入 10 ml Solution II，顛倒混勻使菌體wan全裂解，直到溶液變清亮、粘稠的紫紅色。

（注意：不可 Votex 劇烈震蕩，以免造成基因組 DNA 片段的污染，所用時(shí)間不要超過(guò) 5 min，以免質(zhì)粒受到破壞，如未wan全變得清亮，可能是菌體太多，可增加 Solution II 的用量，在后續(xù)的操作中 Solution N3 的用量也要相應(yīng)增加）

5. 加入 10 ml Solution N3，立即溫和顛倒混勻，可見紅黃相間的絮狀物產(chǎn)生，繼續(xù)混勻直

到wan全變?yōu)辄S色，靜置 2 min，然后室溫 10,000 rpm 離心 10 min，小心取上清至新管。

（注意：離心后在最上層可能會(huì)出現(xiàn)一層漂浮膜，注意不要倒入吸附柱）

6. 加入 0.3 倍濾液體積的異丙醇，上下顛倒混勻。分兩次（每次不超過(guò) 10 ml）轉(zhuǎn)入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），10,000 rpm 離心 1 min，質(zhì)粒被吸附在膜上，棄濾液，直到所有混合溶液通過(guò)此吸附柱。

7. 向吸附柱中加入 5 ml ToxinOut Buffer，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

8. 加入 10 ml Buffer WB2，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

（注意：Buffer WB2 為濃縮液，按要求加入無(wú)水乙醇，用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發(fā)）

9. 加入 5 ml Buffer WB2，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

10. 將吸附柱放進(jìn)收集管，室溫 10,000 rpm 離心 5 min，甩干膜上殘留乙醇。

11. 將吸附柱置于一個(gè)新的 50 ml 離心管（自備）中，打開管蓋，室溫晾干 5 min，以免殘留乙醇影響下游應(yīng)用。

12. 加入 1 ~ 2 ml 的洗脫液Buffer EB，室溫放置 2 min，12,000 rpm 離心 2 min，離心管底溶液即質(zhì)粒 DNA。

（注意：事先在 65~70℃水浴中預(yù)熱洗脫緩沖液 EB，可增加洗脫效率；

如果需要較多量質(zhì)粒，可將得到的質(zhì)粒溶液重新加入吸附柱中，重復(fù)收集 3 次，可獲得最大洗脫率；如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調(diào)整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之間。

彩色無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒 核酸提取