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熒光定量PCR板的使用回放

2025-05-30 09:50:22102
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  以下是天津本生熒光定量PCR板的使用要點及注意事項:

  一、核心使用規(guī)范

  板型選擇?

  優(yōu)先選用原廠配套板(如Roche LightCycler 96孔板)或兼容品牌(如Bio-Rad白色矮管)

  96孔板標準反應體積為20-100μL,需確??装宀馁|(zhì)為光學級透明聚丙烯

  加樣操作?

  使用低吸附槍頭分裝反應液,避免氣泡產(chǎn)生(氣泡會干擾熒光檢測)

  推薦預混反應體系后再分裝至各孔,減少孔間誤差


PCR.png


  二、實驗流程控制

  封板要求?

  必須使用光學透明封板膜,裸手或粉末手套接觸會污染光學表面

  封板后需離心(1000×g,1分鐘)使液體沉底并消除氣泡

  程序設置?

  基線循環(huán)數(shù)建議設為3-15循環(huán)(由儀器自動計算熒光背景值)

  閾值設定通常為基線熒光標準差10倍,可手動調(diào)整至指數(shù)擴增期

  三、質(zhì)量控制要點

  對照設置?

  必須包含無模板對照(NTC)監(jiān)控污染

  建議添加內(nèi)參基因孔用于數(shù)據(jù)標準化

  性能驗證?

  標準曲線斜率應在-3.1至-3.6之間(對應90-110%擴增效率)

  復孔CV值需<5%,否則需排查加樣誤差或試劑不均問題


1748570071116.jpg


  四、特殊場景處理

  高通量檢測?

  384孔板需配合自動化液體處理系統(tǒng),減少人工操作誤差

  多色熒光檢測時需設置光譜校準孔消除通道間串擾

  數(shù)據(jù)保存?

  實驗數(shù)據(jù)建議實時導出至U盤(需格式化后使用)

  原始數(shù)據(jù)應包含擴增曲線、熔解曲線及Ct值表格

  注:不同儀器型號可能存在具體操作差異,需參照設備手冊,以上資料僅供參考,具體請咨詢技術(shù)老師。

  天津本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業(yè)精神作為標準,以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。

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