實(shí)驗(yàn)用的抑制劑Cocktail怎么選? 抑制劑Cocktail常見(jiàn)問(wèn)題解答
抑制劑 Cocktails 是什么?
抑制劑 Cocktails 是各種化學(xué)抑制劑的混合物,用于阻斷細(xì)胞中的特定生物通路或過(guò)程。通常用于研究 和藥物開(kāi)發(fā),以研究抑制某些酶、信號(hào)通路或其他分子靶點(diǎn)的效果。 常見(jiàn)的抑制劑包括蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑、激酶抑制劑等。
抑制劑 Cocktails 應(yīng)用場(chǎng)景
① 蛋白質(zhì)研究:
保持蛋白質(zhì)的完整性并防止降解, 在蛋白質(zhì)純化過(guò)程中抑制不必要的酶活性
② 細(xì)胞培養(yǎng):
通過(guò)阻斷參與細(xì)胞程序性死亡的途徑, 維持細(xì)胞活力或防止細(xì)胞凋亡(細(xì)胞死亡)
③ 酶學(xué)檢測(cè):
抑制背景酶活性, 確保準(zhǔn)確測(cè)量特定酶反應(yīng)
④ 組織保存:
通過(guò)抑制導(dǎo)致組織分解 的酶來(lái)防止組織樣本降解
⑤ 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究:
阻斷特定的信號(hào)傳導(dǎo)途徑, 研究它們?cè)诩?xì)胞過(guò)程中的作用
MCE 抑制劑 Cocktails
抑制劑 Cocktails 產(chǎn)品包含多種不同的酶抑制劑,可同時(shí)抑制多種酶活性。這些抑制劑可以針對(duì)細(xì)胞 內(nèi)的多個(gè)信號(hào)通路或生物過(guò)程進(jìn)行干預(yù),以實(shí)現(xiàn)更的生物學(xué)研究目的。
抑制劑 Cocktails 可以應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)包括
免疫印跡 (Western Blot, WB),
免疫沉淀 (Immunoprecipitation, IP),
免疫共沉淀 (Coimmunoprecipitation, Co-IP),
pull-down,
免疫熒光 (Immunofluorescence, IF),
免疫組化 (Immunohistochemistry, IHC),
激酶檢測(cè)等。
產(chǎn)品推薦
1、HY-K0010
蛋白酶抑制劑
Cocktail (Solution, EDTA-Free, 100× in DMSO)
Ingredient:AEBSF、Aprotinin、Bestatin 、E-64、Leupeptin 、Pepstatin A
Function:適用于所有蛋白樣品,可有效保護(hù)細(xì)胞及 組織裂解液中總蛋白的穩(wěn)定
2、HY-K0011
蛋白酶抑制劑 片劑 (EDTA-Free) Cocktail
Ingredient:AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64 、Leupeptin
Function:一片可用于 10 mL 樣品, 適用于所有蛋白樣品, 可有效保護(hù)細(xì)胞及組織裂解液中總蛋白的 穩(wěn)定簡(jiǎn)單,便捷,便于保存
3、 HY-K0012
蛋白酶抑制劑 Cocktail, 細(xì)菌款 (EDTA-Free,100× in DMSO)
Ingredient:AEBSF 、Bestatin·E-64 、Pepstatin A
Function:用于細(xì)菌蛋白提取,可有效抑制細(xì)菌提取物中的 各種蛋白酶活性
4、HY-K0013
蛋白酶磷酸酶抑制劑 通用型 (EDTA-Free, 10× in ddH Cocktail, 2O)
Ingredient:Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin hemisulfate、β-Glycerophosphate、Sodium fluoride、Sodium orthovanadate、Sodium pyrophosphate decahydrate
Function:質(zhì)譜兼容,適用于所有蛋白樣品,可以有效 抑制常規(guī)的細(xì)胞或組織提取物中的各種蛋白酶 和磷酸酶
5、HY-K0021
磷酸酶抑制劑 Cocktail l (100× in DMSO)
Ingredient:(-)-p-Bromotetramisole oxalate、Cantharidin 、Microcystin LR Microcystis aeruginosa
Function:信號(hào)通路研究,可有效抑制堿性磷酸酶和絲氨酸/ 蘇氨酸磷酸酶,如:PP1、PP2A,用于維持蛋白 的磷酸化狀態(tài)
6、HY-K0022
磷酸酶抑制劑 Cocktail Ⅱ (100× in ddH2O)
Ingredient:Sodium fluoride 、Sodium orthovanadate、Sodium tartrate dihydrate、Sodium molybdate、Imidazole、
Function:信號(hào)通路研究,可廣譜抑制酸性、堿性和蛋白酪 氨酸磷酸酶 (PTPs),用于維持蛋白的磷酸化狀態(tài)
7、HY-K0023
磷酸酶抑制 Cocktail Ⅲ (100× in DMSO)
Ingredient:(-)-p-Bromotetramisole oxalate 、Cantharidin、Calyculin A
Function:信號(hào)通路研究,可有效抑制絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶 和堿性磷酸酶,用于維持蛋白的磷酸化狀態(tài)
8、HY-K0017
激酶抑制劑 Cocktail
Ingredient:(-)-p-Bromotetramisole oxalate、Cantharidin、Calyculin A
Function:通用型蛋白激酶抑制劑,可用于檢測(cè)激酶活性
9、HY-K0030
去乙酰化酶抑制劑 Cocktail (100× in 70% DMSO)
Ingredient:Trichostatin A、EX-527、Nicotinamide 、Sodium butyrate
Function:用于維持蛋白的乙?;癄顟B(tài)
客戶驗(yàn)證
常見(jiàn)問(wèn)題解答
1. 如何選擇適合實(shí)驗(yàn)的抑制劑 Cocktail?
根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇適當(dāng)?shù)囊种苿?Cocktail。建議參考說(shuō)明書抑制劑組分并根據(jù)實(shí)驗(yàn)中的目標(biāo)蛋白和需要 抑制的酶類型進(jìn)行選擇。
2. 不同抑制劑 Cocktails 是否可以混用?MCE 的 3 種磷酸酶抑制劑如何選擇?
可以混用,需要注意不同抑制劑之間、抑制劑與實(shí)驗(yàn)樣品之間的兼容性。MCE 的 3 種磷酸酶抑制劑, HY-K0021、HY-K0023 配方中含有天然化合物且不溶于水,溶劑選擇 DMSO。HY-K0022 含無(wú)機(jī)鹽 可溶于水,溶劑選擇超純水。HY-K0021 和 HY-K0023 均為 HY-K0022 的有效補(bǔ)充,使用時(shí)建議選擇組合 形式:HY-K0021 + HY-K0022 或 HY-K0022 + HY-K0023。也可以單獨(dú)使用,但不推薦。
3. 抑制劑 Cocktails 對(duì)樣品有何影響?
抑制劑 Cocktails 旨在保護(hù)樣品中的蛋白質(zhì),防止其被降解。正常使用時(shí)不會(huì)對(duì)樣品產(chǎn)生負(fù)面影響。若有 特殊樣品,可以行預(yù)實(shí)驗(yàn),觀察其對(duì)樣品的影響。
4. 使用抑制劑 Cocktails 時(shí)是否需要優(yōu)化裂解緩沖液的配方?
一般情況下不需要對(duì)裂解緩沖液的配方進(jìn)行大幅度修改,但為了確保最佳效果,可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要對(duì)緩沖液 的 pH 值和成分進(jìn)行微調(diào)。此外,加入抑制劑 Cocktails 時(shí),確保其與裂解緩沖液充分混合以達(dá)到最佳 抑制效果。
5. 使用抑制劑 Cocktails 是否會(huì)影響下游實(shí)驗(yàn)?
正常使用情況下抑制劑 Cocktails 不會(huì)影響下游實(shí)驗(yàn),如 WB、IP 等。但需注意控制使用量,避免過(guò)量 干擾實(shí)驗(yàn)。如果擔(dān)心對(duì)特定實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)生影響,可以進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)估。
6. 抑制劑 Cocktails 是否對(duì)所有酶類都有效?
MCE 抑制劑 Cocktails 含有多種抑制劑,能廣泛抑制蛋白酶和磷酸酶,但對(duì)于特定的酶類,可能需要補(bǔ)充 特異性抑制劑。
7. 何時(shí)添加抑制劑 Cocktails?抑制劑 Cocktails 的用量如何確定?
對(duì)于樣品提取,應(yīng)在實(shí)驗(yàn)早期階段加入抑制劑 Cocktails,對(duì)于樣品裂解應(yīng)在裂解緩沖液加入同時(shí)加入 Cocktails,以確保對(duì)酶活性的有效抑制。抑制劑 Cocktails 的用量一般會(huì)在產(chǎn)品說(shuō)明書中給出推薦濃度。 通常情況下,少量即可發(fā)揮顯著效果。根據(jù)樣品的體積和實(shí)驗(yàn)需求,按比例添加即可。
8. 發(fā)現(xiàn)抑制劑 Cocktails 抑制效果不理想,怎么辦?
若發(fā)現(xiàn) 抑制劑 Cocktails 抑制效果不理想,可能是用量不足、添加時(shí)間不對(duì)或需要補(bǔ)充特定的抑制劑。 可以嘗試增加用量、調(diào)整添加時(shí)間或調(diào)整抑制劑種類。
9. 如何保存抑制劑 Cocktails?
常規(guī)溶液形式的抑制劑 Cocktails 應(yīng)在 -20°C 儲(chǔ)存,避免反復(fù)凍融。使用時(shí)建議現(xiàn)配現(xiàn)用,可適當(dāng)分裝后 保存,減少凍融次數(shù)。蛋白酶抑制劑 Cocktail,片劑 (HY-K0011) 4°C 儲(chǔ)存即可。
10. 抑制劑 Cocktails 均為 1 mL 包裝,能否提供大包裝?
MCE 抑制劑 Cocktails 以儲(chǔ)液形式提供,實(shí)驗(yàn)需進(jìn)一步稀釋,大包裝會(huì)增加污染風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)凍融次數(shù)增加 也可能會(huì)影響后續(xù)抑制效果,因此常規(guī)規(guī)格為 1 mL。MCE 也可根據(jù)需求提供大包裝定制規(guī)格。
客戶驗(yàn)證文獻(xiàn)
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