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上海語純生物科技有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 10 ×50ul/100×50ul |
|---|---|---|---|
| 貨號 | EC96194 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產業(yè),制藥/生物制藥 |
產品貨號：EC96194
產品規(guī)格：10 ×50ul/100×50ul
本產品僅供科學研究或進一步生產使用，不可用于臨床診斷或治療。
產品介紹
ClearColi K12電轉克隆感受態(tài)
產品簡介
ClearColi K12 感受態(tài)細胞用電擊法轉化的效率較高，故不推薦使用熱激法化學轉化。ClearColi K12
菌株來源于 K12 endArecA-菌株，并在其中引入突變，導致 ClearColi K12 細胞壁外層的脂多糖被修
飾（LPS 的低聚糖鏈被刪除，同時 LPS 的兩個?；溡脖粍h除），進而破壞了 ClearColi K12 大腸
桿菌的內毒素信號通路，使得從該細胞中提取的蛋白或質粒 DNA 中的內毒素含量極低，提取的無
內毒素質粒廣泛應用于后續(xù)的哺乳動物細胞轉化。ClearColi K12 同時缺失核酸內切酶 (endA)和重組
酶 (recA)，提高了質粒 DNA 的產量和質量。吐露港生物開發(fā)的 ClearColi K12 電擊感受態(tài)細胞經特
殊工藝制作，pUC18 質粒檢測的電轉化效率可達 107 cfu/μg DNA。
產品組成
組分
ClearColi K12
電轉化感受態(tài)細胞
10 × 50 μL
100 × 50 μL
定制
基因型：F- λ- ?endA ?recA frr181 msbA52 ?gutQ ?kdsD ?lpxL ?lpxM ?pagP ?lpxP ?eptA
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
無外源質粒 DNA 殘留；
電轉化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中，輕輕彈勻，轉入冰上預冷的電擊轉化杯中；
3. 使用電轉儀進行電擊轉化（轉化參數為：2 mm 電擊杯，2.5 kv，200 Ω，電轉化時間一般為 4-5
ms 左右）；
4. 電擊后迅速取出電擊杯，向其中加入 900 μL 液體 LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預熱），然后
置于 37 ℃搖床復壯 45 min；
5. 取不同體積的轉化產物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰上解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 不應含有較高的離子強度，建議總體積不超過 5 μl，一般為 1-2 μl；
3. 為確保最高轉化效率，電轉化杯一定要在冰上預冷；
4. 如使用 1 mm 電擊杯，則轉化參數改為 1.25 kv 和 200 Ω。
ClearColi K12電轉克隆感受態(tài)
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