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AnnexinV-FIYS/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。

 AnnexinV是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰

（Phosphatidylserine，PS）高親和力特異性結(jié)合。以標(biāo)記了FITC的 AnnexinV作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡

可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。

Propidium iodide（PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但凋亡中晚期和死細(xì)胞由于細(xì)胞膜破裂，因此PI能夠?qū)?/span>

細(xì)胞核染紅。將AnnexinV與PI聯(lián)合使用，可以區(qū)分活細(xì)胞（FITC/PI均為陰性）、凋亡早期 細(xì)胞(FITC陽性、PI均為陰性)、

凋亡晚期或死細(xì)胞(FITC/PI均為陽性)。

本細(xì)胞凋亡檢測試劑盒使用改進(jìn)型的高純度FITC染料，其在紅色通道（690nm）無發(fā)射光，因此極大的減少了對紅色通道的

干擾。使用該試劑盒進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測時(shí)熒光相互干擾更小、檢測更準(zhǔn)確。

組分

組分名稱數(shù)量（20T/100T）

Annexin V-FITC100 μl/500 μl

PI Staining Solution100 μl/500 μl

10×Annexin V Binding Buffer20 ml

應(yīng)用

細(xì)胞凋亡檢測

儲存

2～8℃，有效期1年。

注意事項(xiàng)

1. 整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作。

2. 反應(yīng)完畢后請盡快檢測，反應(yīng)1 小時(shí)后熒光強(qiáng)度就開始衰變。

3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請注意避光。

4. 試驗(yàn)操作過程中佩戴手套等防護(hù)用品。

5. 試驗(yàn)開始前將一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超純水（1:9）稀釋至 1×備用。

AnnexinV-FIYS/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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