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SRM972a血清維生素.D代謝產(chǎn)物(nist標(biāo)準(zhǔn)品)旨在用作對確定人血清中維生素. D代謝物的物質(zhì)濃度的方法進(jìn)行嚴(yán)格評估的準(zhǔn)確度控制.

此SRM還可用作質(zhì)量保證工具，用于為這些成分的內(nèi)部控制材料分配值.

SRM 972a由四個小瓶(1到4級)冷凍血清組成，其中含有不同濃度的25-羥基維生素.)D[25(OH)D]和24r，25-二羥基維生素.D3[24r25(OH)2D3]。

測量血清中的總.25(OH)D濃度，即25-羥基維生素.D2[25(OH)D2]和25-羥基維生素，D3[25(OH)D3]的總和，通常被認(rèn)為是維生素.D狀態(tài)的可靠指標(biāo).3-環(huán)氧-25-羥基維生素.D 3[3-epi-25(OH)D3]的濃度通常不包括在總.25(OH)D中，但該代謝物對某些維生素.D代謝物測定構(gòu)成潛在的測量干擾.24r25(OH)2D3的測量血清中的含量被認(rèn)為是分解代謝的標(biāo)志物和腎臟疾病的指標(biāo)。每瓶SRM 972a含有大約1 mL血清。

SRM 972a 冷凍人血清維生素.D代謝產(chǎn)物   標(biāo)準(zhǔn)品的四個水平中的每一個都以25(OH)D的特定目標(biāo)水平制備.雖然某些測量方法可能適用SRM 972a的四個級別中的每一個，但要認(rèn)識到某些方法可能不適用于某些級別.個人用戶將需要評估哪個級別或哪些級別極適合他們的特定需求.

SRM972a血清維生素.D代謝產(chǎn)物(nist標(biāo)準(zhǔn)品)的1、2和3級是從內(nèi)源性濃度為2 5(OH)D的人血清庫中制備的.第4級是從用3-epi-25-羥基玻璃體D3強(qiáng)化的人血清庫中制備的.

SRM 972a 由所羅門公園研究實(shí)驗(yàn)室（華盛頓州柯克蘭）制備。制備了四個血清池。用于制備 1、2 和 3 級的人血清庫中維生素 .D 代謝物的天然濃度沒有改變。 4 級是富含 3-epi-25(OH)D3 的人血清庫。

SRM 972a 冷凍人血清維生素.D代謝產(chǎn)物   標(biāo)準(zhǔn)品中 25(OH)D3、25(OH)D2 和 3-epi-25(OH)D3 濃度的賦值基于 NIST (ID) 兩種分析方法提供的結(jié)果的組合-LC-MS 和 ID-LC-MS/MS）以及來自 CDC 的兩個 ID-LC-MS/MS 分析程序。 24R、25(OH)2D3 濃度的賦值基于 NIST 的 ID-LC-MS/MS 結(jié)果。通過 ID-LC-MS (NIST) 測量 25(OH)D3、25(OH)D2 和 3-epi-25(OH)D3：血清 (450 mg) 和含有 2 H6-25( OH)D3、2 H3-25(OH)D2 和 2 H3-3-epi-25(OH)D3 在玻璃管中混合，沉淀蛋白質(zhì)，將代謝物萃取到己烷中兩次。合并己烷相并在氮?dú)庀略?0°C蒸發(fā)至干。殘留物用甲醇復(fù)溶，渦流混合。使用 LC-MS 和 (1) Ascentis Express F5 五氟苯丙基色譜柱 (Supelco, Bellefonte, PA) 和 (2) Zorbax SB-CN 氰丙基固定相色譜柱 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA) 分析提取物。五氟苯丙基色譜柱的分析在等度流動相為 26% 水和 74% 甲醇，流速為 0.8 mL/min。所有溶劑組成均以百分比表示體積分?jǐn)?shù)。柱溫保持在 15 °C。在運(yùn)行結(jié)束時將梯度梯度加入到 100% 甲醇中，以洗脫保留的基質(zhì)成分。

在等度條件下對氰丙基色譜柱進(jìn)行分析，流動相為 33% 水和 67% 甲醇（SRM 972a 的 1、2 和 4 級）或 34% 水和 66% 甲醇（3 級），流速為1.0 毫升/分鐘。在運(yùn)行結(jié)束時將梯度梯度加入到 100% 甲醇中，以洗脫保留的基質(zhì)成分。柱溫保持在 45 °C。

表1提供了25(OH)D3、25(OH)D2、3-epi-25(OH)D3和24r、25(OH)2D3的認(rèn)證值.認(rèn)證值是一個值對其準(zhǔn)確性的信心最高，因?yàn)樗幸阎蚩梢傻钠顏碓炊家驯徽{(diào)查或考慮在內(nèi)[1]。認(rèn)證值25(OH)D3、25(OH)D2和3-epi-25(OH)D3是基于同位素稀釋液相色譜質(zhì)譜(ID-LC-MS)[2]和同位素稀釋液的結(jié)果一致色譜串聯(lián)質(zhì)譜(ID-LC-MS/MS)[3]在NIST執(zhí)行的程序，以及在佐治亞州亞特蘭大的疾病控制和預(yù)防中心(CDC)執(zhí)行的兩種不同的ID-LC-MS/MS程序[4.5]。24r、25(OH)2D3的認(rèn)證值基于使用ID-LC-MS/MS進(jìn)行的參考測量程序的結(jié)果NIST[6]。NIST和CDCID-LC-MS/MS方法被檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)可追溯性聯(lián)合委員會(JCTLM)[7，8]認(rèn)定為高階參考測量程序.

表2提供了25(OH)D2和3-epi-25(OH)D3的參考值。參考值是未經(jīng)認(rèn)證的值，是根據(jù)現(xiàn)有數(shù)據(jù)對真實(shí)值的最佳估計;然而，這些值不符合NIST的認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)，并且提供了相關(guān)的不確定性，這些不確定性可能僅反映測量精度，可能不包括所有不確定性來源，或者可能反映多種分析方法之間缺乏足夠的統(tǒng)計一致性[1]。25(OH)D2和3-epi-25(OH)D3的參考值基于在NIST和ID-LC-執(zhí)行的ID-LC-MS和ID-LC-MS/MS程序結(jié)果的一致性。CDC提供的MS/MS.結(jié)果。

表3和表4中提供了總25(OH)D 的認(rèn)證值和參考值，主要用于適用于SRM972a但不單獨(dú)測量維生素.D代謝物的測定。

在需要使用之前，SRM 972a 冷凍人血清維生素.D代謝產(chǎn)物   標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)在-20℃至-80℃的溫度下避光儲存。SRM972a以一組四瓶冷凍血清的形式提供。待使用的小瓶(或多個小瓶）應(yīng)在室溫下在弱光下解凍至少30分鐘。然后在取出測試部分進(jìn)行分析之前，應(yīng)輕輕混合小瓶中的內(nèi)容物。應(yīng)采取預(yù)防措施，避免暴露在強(qiáng)紫外線和陽光直射下。