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怎樣辨別是否細胞污染?

時間:2022/11/1閱讀:1575
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培養(yǎng)細胞最擔心的就是細胞污染,這期繼續(xù)分享如何辨別細胞污染的經(jīng)驗。

 

 

★識別支原體污染

這是一種很難發(fā)現(xiàn)卻經(jīng)常存在的問題。

  • 支原體是最小的(0.3 μm)能夠自我復制的有機體,倒置顯微鏡下通常觀察不到。

  • 支原體沒有細胞壁,對常用的抗生素不敏感。支原體感染是極為不易察覺的,可能直到出現(xiàn)了可以觀察到的病變或發(fā)現(xiàn)細胞正常功能喪失的時候,才意識到是發(fā)生了支原體感染。

  • 在沒有采用特殊的染色方法,也沒有觀察到病變的情況下,實驗總是不成功,就應懷疑被支原體污染。預防支原體污染的惟-途徑是經(jīng)常對細胞進行篩選。

     

 

★防止支原體感染

  • 只使用那些證明沒有污染支原體的血清和培養(yǎng)基。

  • 只接受那些保證沒有支原體感染的細胞。

 

注意:當你怎么樣也得不到一種細胞表面蛋白的抗體,或不能有效地表達某種蛋白質時,可能是由于使用了被支原體感染的細胞。

 

 

 

 

 

★檢測支原體感染

如果這株細胞對你十分重要,那么就應該每4~6周對細胞進行檢測,通常使用下面幾種方法:

●支原體的熒光染色是簡單、便宜也是常用的方法。

●使用支原體的特異引物進行PCR檢測。如果實驗室具備PCR儀和電泳條件,那么這種方法可能是尤為簡單的手段??梢宰约涸O計引物(設計好恰當?shù)膶φ眨?,也可以從公司購買引物。

●把細胞樣品送到能進行支原體檢測的公司檢測。這樣做雖不如自己檢測快(盡管托給公司比較容易,但會很貴),只有一個好處就算是不用自己親自動手。

 

注意:如果你發(fā)現(xiàn)了支原體污染

●合適的方法是立即把細胞丟棄,從新復蘇。

●可以不理會它。

●可以采取某些挽救措施,但是會很困難,只適用于那些不可代替的細胞。簡單的方法是訂購除去支原體的試劑盒。

 

 

 

★交叉污染

細胞還可能被別的細胞污染,這種交叉污染可能更廣泛,許多實驗人員在不經(jīng)意之間培養(yǎng)、使用和凍存了其他的細胞。

如何避免交叉污染:

●只從有保障的地方得到細胞,或者自已檢查細胞。

●不要同時操作多株細胞。不要把多種培養(yǎng)瓶同時放在超凈臺內(nèi)。

●不要使用同一個移液管操作多種細胞。

●不同細胞株不要使用同一瓶培養(yǎng)基或胰蛋白酶。

●操作后不要把移液管放回培養(yǎng)基的瓶中。

●培養(yǎng)維護時,使用栓塞式移液管。

 

注意:

如果你的細胞生長情況或功能突然發(fā)生了變化,在排除支原體污染后,檢查你的細胞是否發(fā)生了交叉污染(這些變化也可能是發(fā)生了突變或漂變)。

 

 

以上就是本期的內(nèi)容,更多資訊,歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術與產(chǎn)品資訊。

 

安培生物科技有限公司介紹:

安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領域客戶,提供*細胞體內(nèi)可代謝的核酸轉染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務;提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質膠產(chǎn)品;提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領域提供優(yōu)質的產(chǎn)品和技術服務,努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)

 

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