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一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;

掌握蒽酮法測定可溶性糖含量的原理和方法。 

二、實(shí)驗(yàn)原理 

強(qiáng)酸可使糖類脫水生成糠醛，生成的糠醛或羥甲基糖醛與蒽酮脫水縮合，形成糠醛的衍生物，呈藍(lán)綠色，該物質(zhì)在620nm處有大吸收。在10-100ug范圍內(nèi)其顏色的深淺與可溶性糖含量成正比。這一方法有很高的靈敏度，糖含量在 30ug左右就能進(jìn)行測定，所以可做為微量測糖之用。一般樣品少的情況下，采用這一方法比較合適。 

三、儀器、試劑和材料 

1 .儀器 

(1) 分光光度計(jì) 

(2) 電子頂載天平 

(3) 三角瓶： 50m1 X 1 

(4) 大試管： 9 支 

(5) 試管架，試管夾 

(6) 漏斗，漏斗架 

(7) 容量瓶： 50 m1 X 2 

(8) 刻度吸管： 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1 

(9) 水浴鍋 

2 .試劑 

(1) 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液： l00ug/ml 

(2) 濃硫酸 

(3) 蒽酮試劑:0.2g 蒽酮溶于100ml濃 H2SO4中當(dāng)日配制使用。 

3 .材料 

小麥分蘗節(jié)（或者其它材料）。 

四、操作步驟 

1 .葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 

取7支大試管，按下表數(shù)據(jù)配制一系列不同濃度的葡萄糖溶液： 

在每支試管中立即加入蒽酮試劑 4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴（水浴鍋）中，管口加蓋玻璃球，以防蒸發(fā)。自水浴重新煮沸起，準(zhǔn)確煮沸 l0min 取出，用流水冷卻，室溫放置 10min ，在 620 nm 波長（分光光度計(jì)）下比色。以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖含量（ug) 作橫坐標(biāo)，以吸光值作縱坐標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。 

2 .植物樣品中可溶性糖的提取 

將小麥分蘗節(jié)剪碎至 2mm 以下，準(zhǔn)確稱取 1g（電子天平）, 放入 50m1三角瓶中，加沸水25m1，在水浴中加蓋煮沸10min ，冷卻后過濾，濾液收集在50m1容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液2m1(移液槍) ，置另一50m1 容量瓶中，以蒸餾水稀釋定容，搖勻測定。 

3 .測定 

吸取lml 已稀釋的提取液于大試管中，加入4.Oml 蒽酮試劑，以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線制作。比色波長 620nm ，記錄吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出葡萄糖的含量（ug）。 

查表所得糖含量(ug)×稀釋倍數(shù) 

五、注意事項(xiàng) 

1 該顯色反應(yīng)非常靈敏，溶液中切勿混入紙屑及塵埃。 

2 H 2 SO 4 要用高純度的。 

3 不同糖類與蒽酮的顯色有差異，穩(wěn)定性也不同。加熱、比色時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格掌握。