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中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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程序降溫儀用于實(shí)現(xiàn)生物樣本的冷凍保存

時(shí)間:2025/5/20閱讀:99
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  程序降溫儀通過(guò)精確控制降溫速率,避免生物樣本在冷凍過(guò)程中因冰晶損傷或滲透壓變化而失活。以下是其實(shí)現(xiàn)冷凍保存的具體步驟及關(guān)鍵技術(shù)要點(diǎn):
  一、程序降溫儀冷凍保存的核心原理:
  低溫保護(hù)劑預(yù)處理:
  使用滲透性保護(hù)劑和非滲透性保護(hù)劑,減少冰晶形成并穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)滲透壓。
  可控降溫速率:
  通過(guò)降溫儀設(shè)定多階段降溫程序,避免快速冷卻導(dǎo)致胞內(nèi)冰晶損傷或慢速冷卻引起溶液效應(yīng).
  低溫儲(chǔ)存:
  最終將樣本轉(zhuǎn)移至液氮或超低溫冰箱長(zhǎng)期保存。
  二、程序降溫儀具體操作步驟:
  1. 樣本準(zhǔn)備與加載
  平衡滲透壓:
  將生物樣本與冷凍保護(hù)劑逐步混合,室溫下緩慢平衡,避免滲透休克。
  分裝與標(biāo)記:
  將樣本分裝至無(wú)菌凍存管或麥管(避免過(guò)多液體導(dǎo)致降溫不均),標(biāo)記名稱、濃度、日期等信息。
  2. 程序降溫儀設(shè)置
  選擇預(yù)設(shè)程序:
  根據(jù)樣本類(lèi)型選擇標(biāo)準(zhǔn)程序,或自定義多階段降溫參數(shù).
  傳感器校準(zhǔn):
  確保凍存管與降溫儀探頭直接接觸(如插入專用樣品架),實(shí)時(shí)監(jiān)控溫度變化。
  3. 降溫執(zhí)行與監(jiān)控
  啟動(dòng)程序:
  將裝載樣本的凍存管放入降溫儀樣品槽,啟動(dòng)程序后自動(dòng)按設(shè)定速率降溫。
  關(guān)鍵參數(shù)記錄:
  實(shí)時(shí)記錄溫度曲線、降溫速率及樣本狀態(tài)(部分高*設(shè)備配備可視化攝像頭)。
  避免溫差突變:
  確保凍存管與降溫儀接觸緊密,避免因空氣間隙導(dǎo)致局部過(guò)冷或升溫。
  4. 超低溫儲(chǔ)存
  液氮冷凍:
  降溫至-40℃以下后,迅速將樣本浸入液氮(或液氮蒸汽相),避免冰晶再生長(zhǎng)。
  長(zhǎng)期存儲(chǔ):
  將樣本轉(zhuǎn)移至液氮罐或-80℃冰箱,定期補(bǔ)充液氮并監(jiān)控溫度穩(wěn)定性。
  5. 復(fù)蘇驗(yàn)證
  快速解凍:
  從液氮中取出樣本后,立即置于37~40℃水浴中快速搖晃解凍(防止冰晶形成)。
  活性檢測(cè):
  通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色、流式細(xì)胞術(shù)或培養(yǎng)法驗(yàn)證細(xì)胞存活率。
 

 

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