程序降溫儀通過(guò)精確控制降溫速率,避免生物樣本在冷凍過(guò)程中因冰晶損傷或滲透壓變化而失活。以下是其實(shí)現(xiàn)冷凍保存的具體步驟及關(guān)鍵技術(shù)要點(diǎn):
一、程序降溫儀冷凍保存的核心原理:
低溫保護(hù)劑預(yù)處理:
使用滲透性保護(hù)劑和非滲透性保護(hù)劑,減少冰晶形成并穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)滲透壓。
可控降溫速率:
通過(guò)降溫儀設(shè)定多階段降溫程序,避免快速冷卻導(dǎo)致胞內(nèi)冰晶損傷或慢速冷卻引起溶液效應(yīng).
低溫儲(chǔ)存:
最終將樣本轉(zhuǎn)移至液氮或超低溫冰箱長(zhǎng)期保存。
二、程序降溫儀具體操作步驟:
1. 樣本準(zhǔn)備與加載
平衡滲透壓:
將生物樣本與冷凍保護(hù)劑逐步混合,室溫下緩慢平衡,避免滲透休克。
分裝與標(biāo)記:
將樣本分裝至無(wú)菌凍存管或麥管(避免過(guò)多液體導(dǎo)致降溫不均),標(biāo)記名稱、濃度、日期等信息。
2. 程序降溫儀設(shè)置
選擇預(yù)設(shè)程序:
根據(jù)樣本類(lèi)型選擇標(biāo)準(zhǔn)程序,或自定義多階段降溫參數(shù).
傳感器校準(zhǔn):
確保凍存管與降溫儀探頭直接接觸(如插入專用樣品架),實(shí)時(shí)監(jiān)控溫度變化。
3. 降溫執(zhí)行與監(jiān)控
啟動(dòng)程序:
將裝載樣本的凍存管放入降溫儀樣品槽,啟動(dòng)程序后自動(dòng)按設(shè)定速率降溫。
關(guān)鍵參數(shù)記錄:
實(shí)時(shí)記錄溫度曲線、降溫速率及樣本狀態(tài)(部分高*設(shè)備配備可視化攝像頭)。
避免溫差突變:
確保凍存管與降溫儀接觸緊密,避免因空氣間隙導(dǎo)致局部過(guò)冷或升溫。
4. 超低溫儲(chǔ)存
液氮冷凍:
降溫至-40℃以下后,迅速將樣本浸入液氮(或液氮蒸汽相),避免冰晶再生長(zhǎng)。
長(zhǎng)期存儲(chǔ):
將樣本轉(zhuǎn)移至液氮罐或-80℃冰箱,定期補(bǔ)充液氮并監(jiān)控溫度穩(wěn)定性。
5. 復(fù)蘇驗(yàn)證
快速解凍:
從液氮中取出樣本后,立即置于37~40℃水浴中快速搖晃解凍(防止冰晶形成)。
活性檢測(cè):
通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色、流式細(xì)胞術(shù)或培養(yǎng)法驗(yàn)證細(xì)胞存活率。
