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冷凍細胞

1.你們提供冷凍細胞系嗎？

目前，我們不提供冷凍細胞，也沒有冷凍細胞的協(xié)議。您可以要求將閃存凍結作為一種自定義選項，以收取額外的處理費。

分解

2.海馬或皮層細胞的生存能力是否取決于解離的方法？你喜歡機械解離還是酶解離？

是的，木瓜蛋白酶可以獲得更高的活產(chǎn)率（參見J Neurosci Meth 71:143），但表面蛋白的消化是不可避免的。在短期內(nèi)（不到4天），這是一個令人擔憂的問題。從長遠來看，這可能并不重要。使用火拋光的9英寸玻璃移液管可獲得更高的生存能力，而使用藍色塑料移液管端可獲得更低的可見性。對于E18組織，為了快速和簡單，我們使用了機械。

3.你用酶來制備皮層培養(yǎng)物嗎？

為了獲得更高的產(chǎn)量，我們使用在不含B27®的Hibernate®E-Ca中稀釋的2mg/mL木瓜蛋白酶溶液。該溶液應在30攝氏度的水浴中培養(yǎng)10分鐘。不應向該溶液中添加EDTA、巰基乙醇或半氨酸HCl等其他化學物質(zhì)。有關更多信息，請參閱我們的初級神經(jīng)元細胞培養(yǎng)方案。

4.為什么您推薦不含B27®的Hibernate®E-Ca與木瓜蛋白酶進行最佳解離？

鈣能促進粘附。因此，去除鈣可以促進神經(jīng)元的解離。為了提供細胞粘附蛋白作為木瓜蛋白酶的主要底物，省略了B27®，這樣B27®中的蛋白質(zhì)就不會競爭底物。

文化

1.原代細胞會增殖嗎？如果會，你能將它們傳代多少次？

原代細胞不增殖，不應傳代。如果傳代，只有30%的細胞存活，并且細胞不能再次傳代。

2.你知道每小瓶組織能提供多少星形膠質(zhì)細胞嗎？

星形膠質(zhì)細胞的數(shù)量是細胞數(shù)量的20%。當生長神經(jīng)元培養(yǎng)物時，不含血清的培養(yǎng)基（NbActiv1™) 用于培養(yǎng)少于2%的星形膠質(zhì)細胞。這抑制了沒有AraC的神經(jīng)膠質(zhì)細胞生長。當生長星形膠質(zhì)細胞時，培養(yǎng)基中含有血清（NbAstro™ - Neurobasic®/馬血清/氨酰胺最大殘留量™) 可用于使星形膠質(zhì)細胞在1.5至2周內(nèi)匯合。

3.什么時候應該添加AraC作為星形膠質(zhì)細胞有絲分裂抑制劑？

在Neurobasic®/B27®/GutaMAX中™ 我們推薦的培養(yǎng)基，您根本不需要添加AraC。該培養(yǎng)基不像血清那樣人工刺激星形膠質(zhì)細胞增殖。

4.星形膠質(zhì)細胞是否增殖？如果增殖，它們可以傳代多少次？

星形膠質(zhì)細胞確實會增殖并且可以傳代。我們的E18星形膠質(zhì)細胞可以成功傳代4-5次。

5.海馬神經(jīng)元什么時候表現(xiàn)出興奮性毒性？

據(jù)我們所知，乙酰堿在任何年齡都是無毒的。

從E18海馬培養(yǎng)7天開始，氨酸的毒性最大。皮質(zhì)神經(jīng)元可能提前1或2天。

6.我的文化被污染了。它們一開始看起來很好，但現(xiàn)在介質(zhì)是多云的黃色，有許多1-3微米長的相暗體。

至少有5種可能的污染源（假設培養(yǎng)箱中的其他培養(yǎng)物沒有被污染，并且培養(yǎng)箱底部的加濕水是干凈的）：

培養(yǎng)皿本身可能是污染源。為了排除這種情況，將新鮮過濾的培養(yǎng)基加入另一個培養(yǎng)容器中。如果介質(zhì)變黃或渾濁，則容器受到污染。

粘性基材。這很常見。您可以將新鮮過濾的培養(yǎng)基放在準備好的基質(zhì)上，以尋找這種污染源。

培養(yǎng)基本身或其中一種添加劑（如氨酸鹽）。這很常見。請確保在您的介質(zhì)的未涂覆井中進行單獨的測試，并由我們提供。

看似隨機或低水平的污染可能來自于朝著開放文化的方向說話甚至呼吸。此外，無菌罩和培養(yǎng)箱之間的空氣不是無菌的，大多數(shù)培養(yǎng)容器都沒有密封。如果從罩子到培養(yǎng)箱有很長的距離，你可以把培養(yǎng)物放在用70%乙醇沖洗過的塑料食品容器里。

組織。盡管我們對我們提供的培養(yǎng)基進行無菌測試，但組織本身無法進行測試。如果您能提供證據(jù)證明您的組織按時到達，并在使用前儲存在4攝氏度，并且排除了上述4種可能性，請致電我們進行一次性更換。通常，我們的經(jīng)驗是，您的樣本是本周我們所有貨物中一被污染的樣本，所以請理解我們需要進行上述測試。

7.我想知道你能不能給我建議，我需要培養(yǎng)多少細胞才能獲得足夠的蛋白質(zhì)來進行幾次蛋白質(zhì)印跡？即，多少個細胞等于20-50微克的蛋白質(zhì)？

根據(jù)Patel和Brewer（2003）的研究，在培養(yǎng)基中生長一周的18000個細胞中，每個細胞含有大約6μg的蛋白質(zhì)。因此，3000個細胞/ug蛋白質(zhì)。需要大約50g蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)印跡提取物將需要大約150000個細胞。

排序

1.如何下采購訂單？

可以使用我們的網(wǎng)站下單。創(chuàng)建帳戶后，您可以通過采購訂單或信用付款。

2.您的付款條件是什么？

Transnetyx Tissue的標準付款條件是凈30。

3.你們有多單位折扣嗎？

是的，我們的一些目錄有多單位折扣。要獲得折扣，商品必須同時發(fā)貨。

4.你們的運輸時間表是什么？

我們可以在收到訂單后24小時內(nèi)發(fā)貨。E18和成年大鼠和小鼠組織在周二、周三和周四發(fā)貨。周一至周四運送媒體和其他物資。對于定制或特殊訂單項目，我們需要2-3周的訂單交付時間。

5.你們在國際上發(fā)貨嗎？

Transnetyx Tissue通過聯(lián)邦快遞提供國際貨運服務。如果您的公司有聯(lián)邦快遞賬戶，他們想收取運費、關稅和稅款，請在訂單上注明。否則，運費和關稅將包含在您的發(fā)票中。

所有國際貨運安排在周一的Media或周二的Tissue。這樣可以留出通關時間。請至少提前一個工作日提交訂單，以適應此運輸時間表。請確保提交任何特定于您所在國家的海關文件。我們只提供標準的海關文件，對因文書工作不足而造成的海關延誤不承擔責任。

其他

1.我是否應該意識到任何道德問題？

目前的程序由機構動物使用和護理委員會批準。