Hec-1-b人子宮內(nèi)膜腺癌細胞

細胞純度可達 90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、 HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

規(guī)格：>5×100000cells/ml瓶，細胞可以達到15倍增

含量：>1x10⁶  個/mL

運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送

細胞用途：僅供科研使用。

HEC-1-B    人子宮內(nèi)膜腺癌細胞冷凍及保存方法：

（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復蘇；

（2）細胞存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。

HEC-1-B    人子宮內(nèi)膜腺癌細胞培養(yǎng)方法如下：

1、將細胞稀釋到1000個細胞/mL，接種到24孔板，每孔1ml。

2、接種后第二天在100ug/mL~1mg/mL的G418濃度范圍內(nèi)進行篩選。

3、每隔3天跟換1次培養(yǎng)液，保持G418濃度不變。

4、選擇出在10~14天內(nèi)使腺癌細胞全部死亡的最低G418濃度來進行下一步的篩選試驗。由于每種細胞對G418的敏感性不同，一般變動在100ug/ml～1000ug/ml范圍。

細胞來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。

Hec-1-b人子宮內(nèi)膜腺癌細胞

培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備基礎(chǔ)培養(yǎng)基( GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸鈉 0.11g/L)；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

細胞注意事項：

1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2.先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時（4h左右），穩(wěn)定細胞狀態(tài)，切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜。

3.靜置后鏡檢，拍照，記錄細胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。

4.  懸浮細胞：將細胞瓶內(nèi)液體都轉(zhuǎn)移至無菌離心管內(nèi)，1000 轉(zhuǎn)/分鐘離心5min，培養(yǎng)基上清可備用，管底細胞沉淀用培養(yǎng)基重懸。鏡檢時若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞瓶內(nèi)培養(yǎng)；若密度未超過80%，細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，待達到80%時再正常傳代。備注：聚團生長慢，有密度依賴，必須使用T25培養(yǎng)瓶豎立培養(yǎng)，3天一次半量換液一次，1-2周傳代一次。

貼壁細胞：若細胞密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，收集細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。備注：細胞貼壁慢，傳代后細胞放2天不動。

5.細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗，可收集后4℃保存?zhèn)溆?，可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，一半用客戶自備的培養(yǎng)基，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件，以免因不適應而造成生長狀態(tài)不佳。