HEB人腦膠質細胞

規(guī)格①：一代凍存管細胞，干冰運輸，貨期2-3天

規(guī)格②：70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細胞一瓶

特點：細胞代數為4代以內，細胞耐藥倍數8倍以上；

包裝：內層無菌自封袋；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；附帶中文指導說明書

細胞來源：ATCC、sciencell、ICLC等
貨期：1-2周

運輸方式：快遞運輸（空運可抵達的目的地優(yōu)先派發(fā)聯邦空運）

售后：規(guī)格①收到細胞一個月內，規(guī)格②收到細胞后14天內，如發(fā)現細胞有質量問題（如污染，死亡，快遞運輸等原因）時，應出具書面質量問題報告并及時傳真或致銷售人員，我們將盡快為您解決！

HEB人腦膠質細胞

培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備基礎培養(yǎng)基( GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸鈉 0.11g/L)；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

細胞注意事項：

1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯系。

2.先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數小時（4h左右），穩(wěn)定細胞狀態(tài)，切忌在溫箱內靜置過夜。

3.靜置后鏡檢，拍照，記錄細胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。

4.  懸浮細胞：將細胞瓶內液體都轉移至無菌離心管內，1000 轉/分鐘離心5min，培養(yǎng)基上清可備用，管底細胞沉淀用培養(yǎng)基重懸。鏡檢時若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞瓶內培養(yǎng)；若密度未超過80%，細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，待達到80%時再正常傳代。備注：聚團生長慢，有密度依賴，必須使用T25培養(yǎng)瓶豎立培養(yǎng)，3天一次半量換液一次，1-2周傳代一次。

貼壁細胞：若細胞密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，收集細胞瓶內的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。備注：細胞貼壁慢，傳代后細胞放2天不動。

5.細胞瓶內的培養(yǎng)基含血清和雙抗，可收集后4℃保存?zhèn)溆?，可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內的培養(yǎng)基，一半用客戶自備的培養(yǎng)基，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件，以免因不適應而造成生長狀態(tài)不佳。