支原體核酸檢測法（常規(guī)PCR、熒光定量PCR）應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)、生物制藥工業(yè)和細(xì)胞治療領(lǐng)域具有很多優(yōu)勢。和傳統(tǒng)方法比較，它具有①靈敏度高，特異性好。②時(shí)間短，2-3小時(shí)出結(jié)果。③操作簡單等特點(diǎn)，可替代傳統(tǒng)的培養(yǎng)法和DNA染色法。
歐洲藥典（EP 2.6.7）規(guī)定，支原體核酸法如要替代【指示細(xì)胞培養(yǎng)法】（又稱為DNA染色法），需要驗(yàn)證核酸法靈敏度達(dá)到100CFU/ml，并根據(jù)支原體污染發(fā)生的頻率，推薦選擇下列9種支原體進(jìn)行檢測：
據(jù)小編市場調(diào)查后發(fā)現(xiàn)，德國MB公司（全稱Minerva Biolabs）生產(chǎn)的【100CFUTM靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品】廣泛被國內(nèi)外各大藥廠用于支原體核酸法的方法學(xué)驗(yàn)證，被稱為該領(lǐng)域的“金標(biāo)準(zhǔn)”。
【100CFUTM靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品】為凍干粉形式，一共有10種（見下表），其中涵蓋了歐洲藥典（EP 2.6.7）列舉的9個支原體物種，可用于qPCR和PCR方法的靈敏度以及耐用性驗(yàn)證，使得核酸法可作為DNA染色法的替代方法。
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | NCTC編號 | ATCC編號 |
103-1003 | 精氨酸支原體 | 標(biāo)準(zhǔn)品3管， 陰性對照2管/盒 | 10129 | 23838 |
103-2003 | 口腔支原體 | 10112 | 23714 | |
103-3003 | 雞敗血支原體 | 10115 | 19610 | |
103-4003 | 肺炎支原體 | 10119 | 15531 | |
103-5003 | 關(guān)節(jié)液支原體 | 10124 | 25204 | |
103-6003 | 發(fā)酵支原體 | 10117 | 19989 | |
103-7003 | 豬鼻支原體 | 10130 | 17981 | |
103-8003 | 萊氏無膽甾原體 | 10116 | 23206 | |
103-9003 | 檸檬螺原體 | 10164 | 27556 | |
103-1103 | 唾液支原體 | 10113 | 23064 |
保存：凍干粉在2-8℃保存
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1) 來自英國菌種保藏中心NCTC，為標(biāo)準(zhǔn)支原體株
2) 支原體已滅活，不會對實(shí)驗(yàn)室造成污染，保障細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室安全
3）傳代次數(shù)少，支原體無變異
4）產(chǎn)品為凍干粉，保證其穩(wěn)定性
5）分析證書（COA）提供該批次GU：CFU比值（支原體基因組/菌落數(shù)比值）
注意：
1.使用時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵循說明書操作流程。任何偏離可能會造成結(jié)果誤差。
2.加入100CFU標(biāo)準(zhǔn)品的樣品不能超濾濃縮，否則會導(dǎo)致結(jié)果不可靠。
3.標(biāo)準(zhǔn)品不建議稀釋。
使用說明：
試劑使用前，先達(dá)到室溫平衡。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品管離心，以收集凍干粉至管底。 |
2. 每管加入1ml樣品基質(zhì)液。 |
3. 室溫靜置5分鐘。 |
4. 渦旋振蕩10秒鐘，再離心5秒鐘。 |
5. 使用合適體積的標(biāo)準(zhǔn)品用于DNA抽提。推薦使用MB公司生產(chǎn)的支原體DNA提取試劑盒（品名：Venor®GeM Sample Preparation Kit）。 |
6. 使用合適體積的抽提DNA用于PCR擴(kuò)增。 |
陰性對照樣品的制備，步驟同上。推薦適當(dāng)重復(fù)試驗(yàn)，并推薦使用MB公司的常規(guī)PCR檢測試劑盒 (品名：Venor®GeM Classic， 貨號11-1025/-1050/-1100/-1250) 或qPCR試劑盒 (品名：Venor®GeM qEP，貨號11-9025/-9100/-9250)。
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