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人卷曲蛋白8（FZD8）ELISA Kit
人卷曲蛋白8（FZD8）ELISA Kit是生物醫(yī)學(xué)研究與臨床檢測(cè)領(lǐng)域用于精準(zhǔn)測(cè)定人體樣本中卷曲蛋白 8（FZD8）含量的關(guān)鍵工具。FZD8 屬于卷曲蛋白家族成員，作為一種跨膜受體蛋白，在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路中扮演著至關(guān)重要的角色。它參與經(jīng)典 Wnt/β - 連環(huán)蛋白信號(hào)通路以及非經(jīng)典 Wnt 信號(hào)通路的激活，對(duì)細(xì)胞的增殖、分化、遷移、凋亡等生理過(guò)程具有重要調(diào)控作用。FZD8 表達(dá)異常與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，準(zhǔn)確檢測(cè) FZD8 含量對(duì)于深入探究疾病機(jī)制、早期診斷及治療方案制定意義重大。
該試劑盒基于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）原理設(shè)計(jì)。試劑盒內(nèi)的酶標(biāo)板預(yù)先包被有針對(duì)人 FZD8 的高特異性抗體。當(dāng)含有 FZD8 的樣本，如細(xì)胞裂解液、組織勻漿、血清或血漿等加入酶標(biāo)板孔中時(shí)，樣本里的 FZD8 抗原迅速與包被抗體特異性結(jié)合，形成抗原 - 抗體復(fù)合物。隨后加入酶標(biāo)記的另一種針對(duì) FZD8 的抗體，該抗體能夠識(shí)別已結(jié)合在包被抗體上的 FZD8，進(jìn)而構(gòu)建起穩(wěn)定的抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。加入酶的底物后，在酶的催化作用下，底物發(fā)生顯色反應(yīng)，顏色深淺與樣本中 FZD8 的含量呈正相關(guān)。通過(guò)酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，并與試劑盒所提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì)，即可精確計(jì)算出樣本中 FZD8 的含量。
在操作流程方面，規(guī)范采集樣本是首要步驟。以細(xì)胞裂解液樣本制備為例，需嚴(yán)格遵循細(xì)胞培養(yǎng)及裂解的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)要保證細(xì)胞處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)，收集細(xì)胞后，使用合適的裂解液在冰上充分裂解細(xì)胞，確保 FZD8 充分釋放且不被降解。從冷藏環(huán)境取出試劑盒后，需將其置于室溫環(huán)境平衡一段時(shí)間，使試劑盒各組分達(dá)到適宜的反應(yīng)溫度。嚴(yán)格按照說(shuō)明書，精確吸取適量樣本、不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品以及空白對(duì)照，分別加入酶標(biāo)板相應(yīng)孔中。加入酶標(biāo)抗體后，輕輕振蕩使反應(yīng)體系充分混勻，然后將酶標(biāo)板放入 37℃恒溫孵育箱中，孵育特定時(shí)間，確?？乖贵w反應(yīng)充分進(jìn)行。孵育結(jié)束，用洗滌緩沖液多次洗滌酶標(biāo)板，徹di清除未結(jié)合的多余物質(zhì)，降低非特異性干擾。緊接著加入底物溶液，在避光條件下進(jìn)行顯色反應(yīng)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)迅速用酶標(biāo)儀讀取各孔吸光度數(shù)值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定樣本中 FZD8 的濃度。