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深圳市科潤達生物工程有限公司
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DRG 細小病毒B19 IgM ELISA試劑盒

時間:2011/11/3閱讀:1675
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DRG 細小病毒B19 IgM ELISA試劑盒
(德國DRG*,貨號:EIA3504)
德國DRG中國*代理商“深圳科潤達生物工程有限公司”竭誠為您服務

 
 
1、說明
DRG公司的吸小病毒B19 IgM酶免試劑盒可用于人血清中抗細小病毒B19 IgM抗體的定性和定量檢測。此試劑盒僅供體外診斷用,在美國,此試劑盒僅供研究用。
2、實驗原理
DRG公司的細小病毒B19 IgM ELISA試劑盒是一種固相的酶聯(lián)免疫吸附實驗,包被板的微孔中包被了重組的細小病毒B19抗原)。將稀釋好的病人樣品和即用型的質控品加入到微孔中,溫育期間,陽性樣品和質控品中的細小病毒B19特異性抗體會結合到固相抗原上。洗板除去未結合的樣品,再微孔中加入辣根過氧酶標記的抗人IgM抗體。在第二次溫育中,IgG酶聯(lián)物會結合到這些特異性的IgM抗體上而產生酶聯(lián)免疫復合物。第二次洗板除去未結合的酶聯(lián)免疫復合物。加入TMB底物液后,溶液顯示藍色。之后加入終止液終止酶促反應,此時容易由藍色變成黃色。溶液所顯示的顏色強度與樣品中細小病毒B19特異性IgM抗體的濃度成反比,450nm處讀取OD值。
3、試劑盒成分
 

  • 包被板:12*8(可拆),96孔,微孔中包被了重組的細小病毒B19抗原(VP1蛋白)
  • 樣品稀釋液:1支,100ml,即用,黃色,pH7.2±0.2
  • 陽性質控,1支,2.0ml,即用,黃色,紅蓋
  • 陰性質控,1支,2.0ml,即用,黃色,黃蓋
  • 臨界質控,1支,2.0ml,即用,黃色,黑蓋
  • 酶聯(lián)物,1支,20ml,即用,紅色,內含辣根過氧酶標記的抗人IgM
  • 底物液,1支,14ml,即用,內含TMB底物液
  • 終止液,1支,14ml,即用,內含0.5mol/L的H2SO4,避免接觸終止液,以免刺激或著燒皮膚。
  • 洗滌液,1支,30ml(40倍濃縮,可稀釋到1200m),pH7.2±0.2

4、樣品
此實驗中將用到血清,不能使用溶血、黃疸血或脂血樣品。
 

  1. 樣品的采集,血清,靜脈穿刺采集全血,待其凝血,在室溫下用離心機分離血清。未*凝血前請勿離心,接受了抗凝劑治療的病人樣品可能需要更長的凝血時間。
  2. 樣品的儲存:必須蓋住樣本并在實驗之前于2-8℃下可貯存至24小時。樣品需要更長的貯存時間,必須在實驗之前于-20℃下一次性凍存。融化的樣本在檢測之前必須要上下倒置幾次。
  3. 樣品的稀釋:實驗開始前,用零標準品按1:100的比例稀釋樣品。10μL樣品+1ml樣品稀釋液,混合,靜置15分鐘,混合均勻。注意:質控品是即用型的,不必稀釋。

5、實驗步驟
實驗開始前,按照稀釋步驟稀釋好洗滌液,準備好樣品,確定樣品和標準品的數量。
 

  1. 將所需數目的板條置于板架上,實驗至少做以下幾孔。

1孔(如A1孔),用來做空白孔
1孔(如B1孔),用來做陰性質控
2孔(如C1+D1),用來做臨界質控
1孔(如E1),用來做陽性質控
用戶自己決定質控品和樣品是否做雙孔。
 

  1. 在所有的微孔中加入洗滌液,浸泡5分鐘。棄取孔內反應液,吸水紙上拍干以除去殘余液體。
  2. 在B1孔內加入100ul陰性質控,

在C1和D1孔內分別加入100ul臨界質控
在E1孔內加入100ul陽性質控
在相應的樣品孔內分別加入100ul稀釋好的樣品,A1空白孔不用加。
 

  1. 蓋板,室溫溫育(22-25℃)60分鐘。
  2. 棄去孔內的反應液。用稀釋好的洗滌液洗板3次(每孔300ul),在吸水紙上把板拍干以除去殘余液體。注意:洗板步驟是否正確會明顯影響實驗的靈敏度和精密度。
  3. 加100μl的酶聯(lián)物于各孔中,除A1孔。
  4. 蓋板,室溫溫育(22-25℃)30分鐘。
  5. 棄去孔內的反應液。用稀釋好的洗滌液洗板3次(每孔300ul),在吸水紙上把板拍干以除去殘余液體。注意:洗板步驟是否正確會明顯影響實驗的靈敏度和精密度。
  6. 每孔加100μl底物液。
  7. 蓋板,室溫避光溫育(22-25℃)15分鐘。
  8. 每孔加100μl終止液,溶液由藍色變成黃色。
  9. 加終止液后30分鐘內在450nm波長讀取OD值。

6、實驗的有效性
如果實驗能滿足如下標準則認為實驗有效:
空白孔A1:OD值低于0.100
陰性質控B2孔:OD值低于0.200
臨界質控(CO)C1/D1:OD值在0.250-0.600之間
陽性質控E1孔:OD值必須大于臨界質控
7、結果計算
臨界質控平均吸光度值(CO)
計算兩個臨界質控的平均OD值,如(0.44+0.45)/2=0.445=CO
8、結果說明
陽性:病人樣品的平均OD值比臨界OD值高20%以上的樣品,(病人樣品OD>1.2倍CO)
灰區(qū):病人樣品的平均OD值在120%CO和90%CO范圍內的樣品,(0.9倍CO≤人樣品OD≤1.2倍CO=。將灰區(qū)樣品重新檢測,如果樣品OD仍位于灰區(qū),則樣品為陰性樣品。
陰性:病人樣品的平均OD值比臨界OD值低10%以上的樣品,(人樣品OD<0.9倍CO=。
 
結果按DRG單位計算(DU)
病人樣品平均OD值*10/CO=DU(DRG 單位)
例如:1.580*10/0.445=35DU
結果說明:
臨界值:10DU
灰區(qū):9-12DU
陰性:<9DU
陽性:>12DU
 
 
 
本譯文僅供參考,詳情請以原文為準。
 
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