ELISA試劑盒的關(guān)鍵是要具備高質(zhì)量純化或重組的抗原，對生產(chǎn)廠家的抗原要求很高。由于純化的或重組的抗原越來越多，以及商品化的高質(zhì)量的ELISA試劑盒的面市，它應用于臨床免疫實驗室的自身抗體的檢測已日漸增多，該法檢測自身抗體快速、敏感及特異性高。
一、免疫熒光法----自身抗體診斷的標準技術(shù)（IFA）
免疫熒光測定法可分為直接和間接兩類，在自身抗體檢測中，以間接免疫熒光法尤為常用。由于自身抗原的位置決定了其相應的抗體的典型熒光模式，該法能通過顯微鏡觀測精確地判斷組織或細胞內(nèi)熒光的分布。
將已稀釋血清與實驗基質(zhì)進行溫育，令特異性抗體與實驗基質(zhì)中相應抗原結(jié)合，然后再與熒光標記的第二抗體溫育，最后在熒光顯微鏡下觀察相應部位的特異性熒光模式。
此方法敏感、重復性好。但需要一臺質(zhì)量較好的熒光顯微鏡，且對操作人員要較高，操作復雜耗時長，繁瑣。
二、免疫印跡法（Immunoblotassay）（westerblot）
此法是將聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白及多肽與免疫反應的高特異性相結(jié)合的一項技術(shù)。蛋白質(zhì)在電泳中依分子量大小分離，然后將分離好的蛋白轉(zhuǎn)印到硝酸纖維薄膜上，用酶標記的抗體或蛋白A進行染色。該法簡單、快速。是目前美國、中國等國際上眾多國家衛(wèi)生機構(gòu)的最終確認方法。但其制備方法繁瑣、成本相對較高。
