詳細(xì)介紹
1. 將各種試劑移到室溫(18-25℃)平衡半小時(shí),取一瓶20×洗液,加蒸餾水至1000 ml,混勻后備用。
2. 將酶聯(lián)板從密封袋中取出,設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,只加標(biāo)本稀釋液,兩個(gè)陽(yáng)性對(duì)照孔,兩個(gè)陰性對(duì)照孔,取陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照分別充分混勻后各100μl加入相應(yīng)對(duì)照孔中,其余每個(gè)檢測(cè)孔先加標(biāo)本稀釋液100μl,再加待檢血清5μl,充分混勻,將酶聯(lián)板置微板振蕩器上混合5-10秒,用不干膠封片封蓋反應(yīng)板。未用完的板條放在密封袋中保存。
3. 酶聯(lián)板置37℃溫育30分鐘,小心吸干孔中血清,用洗滌液洗5次,每次放置20-30秒,然后在吸水紙上拍干。
4. 每孔加酶結(jié)合物100μl ,用不干膠封片封蓋酶聯(lián)板。37℃溫育30分鐘, 洗板5次,操作同上,拍干。
5. 每孔加顯色劑A 50μl ,顯色劑B 50μl ,輕輕振蕩后置37℃暗處顯色10分鐘,每孔加終止液50μl。
6. 選擇酶標(biāo)儀測(cè)定波長(zhǎng)450nm,用空白孔調(diào)零點(diǎn),測(cè)定各孔A值。也可選擇參考波長(zhǎng)630nm,用雙波長(zhǎng)測(cè)定,勿需調(diào)零。