牛結(jié)節(jié)性皮膚病間接ELISA抗體檢測試劑盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：12個月

實驗原理

在反應(yīng)板微孔中包被牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒特異性抗原，待檢血清中的特異性抗體與包被抗原特異性結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物。加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的抗牛 IgG 抗體，與微孔中的抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。加入 TMB 顯色底物后，微孔中結(jié)合的 HRP 催化底物反應(yīng)呈藍(lán)色。顏色反應(yīng)的深淺與樣品中存在的抗牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒特異性抗體的量成正比。

試劑盒組成

包被板2*96

酶結(jié)合物工作液25 mL

陽性對照2 mL

陰性對照2 mL

樣品稀釋液50 mL

濃縮洗液 10×60 mL

底物 A 液12 mL

底物 B 液12 mL

終止液12 mL

封板膜2 張

血清稀釋板2*96

說明書1 份

操作步驟

1.準(zhǔn)備：所有試劑在使用前應(yīng)先恢復(fù)至 15～25℃，通過渦旋振蕩器輕振所有試劑混勻；

2.取出密封的抗原包被板，沿包裝袋切口處撕開，記錄樣品位置；

3.待檢樣品稀釋：將待檢樣品用樣品稀釋液按 1:50 倍稀釋（196

µL 樣品稀釋液中加 4 µL 待檢血清樣品），陰陽性對照不用稀釋；

4.在 ELISA 包被板上：加入稀釋好的樣品，100µL/孔，陽性對照血清加 2 孔，100µL/孔；陰性對照血清加 2 孔，100µL/孔； 貼上封板膜；

5.置 37℃恒溫箱中避光孵育 30 min；

6.小心取掉封板膜，棄去孔中液體。每孔加約 300μL 洗液 1×， 靜置 1min 后，棄去洗滌液。洗滌 4 次，最后一次拍干。洗板間隔應(yīng)避免微孔干燥后在吸水紙上拍干；

7.在所有孔內(nèi)加入 100μL 的酶結(jié)合物工作液；

8.置 37℃恒溫箱中避光孵育 30 min；

9.小心取掉封板膜，棄去孔中液體。洗滌 4 次，方法同 6；

10.將底物 A 液與底物 B 液按 1:1 混合，加入孔中，100 µL/ 孔， 貼上封板膜；

11.置 37℃恒溫箱中避光孵育 10 min；

12.每孔加入 50μL 終止液，振蕩混勻，5min 內(nèi)在酶標(biāo)儀 450nm 讀數(shù)。

注意事項

1.所有實驗過程應(yīng)遵守農(nóng)業(yè)農(nóng)村部關(guān)于牛結(jié)節(jié)性皮膚病檢測相關(guān)的規(guī)定。

2.牛結(jié)節(jié)性皮膚病間接ELISA抗體檢測試劑盒僅用于體外診斷使用，應(yīng)2～8℃冷藏運輸。

3.所有的試劑在使用前應(yīng)先恢復(fù)至18～25℃，用渦旋振蕩器振蕩混勻。

4.濃縮洗液10×在低溫條件下會產(chǎn)生結(jié)晶，使用前要溫育使其溶解。

5.注意防止試劑盒成分的污染，不同批次試劑盒成分不要混用， 不要使用超過有效期的試劑，未用完的反應(yīng)板條應(yīng)加干燥劑密封，連同未使用完試劑放回2～8℃保存。

6.待檢血清數(shù)量較多時，應(yīng)先稀釋完所有待檢血清，再加到反應(yīng)板上， 使反應(yīng)時間一致。

7.底物 A 液和底物 B 液對強(qiáng)光和氧化劑敏感，應(yīng)避光保存，防止氧化劑污染，對皮膚有刺激性。

8.樣品稀釋液、對照血清與酶標(biāo)抗體中含有微量防腐劑，應(yīng)防止與皮膚接觸。

9.試驗廢料、廢水等應(yīng)做無害化處理，以免污染環(huán)境。

10.嚴(yán)格遵守這些條款可以獲得理想的結(jié)果，特別是液體用量、作用時間和溫度必須準(zhǔn)確。