BD 762165 全血RNA采集管 RNA-seq實(shí)驗(yàn)所需試劑耗材，華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨供應(yīng)，歡迎咨詢

血液是一種信息量巨大、獲取方便且微創(chuàng)的樣本類型，廣泛用于診斷和臨床研究，以探索疾病的病理和生理機(jī)制以及療法的作用。全血轉(zhuǎn)錄組測序是一種基于RNA測序（RNA-Seq）的方法，可對全血進(jìn)行深入的基因表達(dá)譜分析，深入了解全系統(tǒng)范圍內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)和豐度。高通量RNA-Seq技術(shù)的發(fā)展使我們能夠以較低的成本收集高質(zhì)量的血液轉(zhuǎn)錄組信息，為發(fā)現(xiàn)生物標(biāo)志物、了解藥物反應(yīng)、病理和生理過程以及疾病的無創(chuàng)診斷帶來了革命性的變化。

外周血的優(yōu)勢在于采集快捷，且可在大規(guī)模人群中實(shí)現(xiàn)。然而，一旦血液離開人體，問題就來了。傳統(tǒng)方法需要從全血中分離白細(xì)胞，再提取RNA，以解決血液中污染物的問題。如今，專門為制備血液樣本而開發(fā)的方案使我們能夠從全血中獲得高質(zhì)量的RNA-Seq 數(shù)據(jù)。

什么是 RNA-Seq ？

RNA-seq即轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)（Transcriptome sequencing），廣義的定義為：對細(xì)胞內(nèi)所有RNA（包括rRNA/ tRNA/ mRNA等）進(jìn)行高通量測序，狹義的定義為：對細(xì)胞內(nèi)mRNA進(jìn)行高通量測序，臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室指的一般為狹義的轉(zhuǎn)錄組測序。

血液樣本

任何血液轉(zhuǎn)錄組分析實(shí)驗(yàn)的第一步都是通過靜脈穿刺或指針采血。從少量血液中獲取優(yōu)質(zhì)RNA的技術(shù)進(jìn)步，如通過指針采樣，將使廣泛的研究成為可能，參與者甚至可以進(jìn)行自我采樣。

血液RNA降解可能發(fā)生在采集、儲存和處理過程中，因此，血液排出體外后，必須防止或減少RNA降解。而血液RNA極易降解的原因之一是血漿中含有高濃度的RNA酶（RNase）。在一項(xiàng)研究中，血漿內(nèi)的游離RNA僅在15 秒鐘就發(fā)生降解，導(dǎo)致無法進(jìn)行實(shí)時PCR擴(kuò)增，RNA酶的威力由此可見一斑。因此，在采集全血時立即抑制RNA酶的活性至關(guān)重要，這樣才能確保采集高質(zhì)量的RNA，這對下游測序、生物標(biāo)記物鑒定和疾病診斷至關(guān)重要。

為了降低RNA的降解，特別是在開展大規(guī)模血液轉(zhuǎn)錄組學(xué)項(xiàng)目時，我們建議使用專門RNA采xue管收集血液，如PAXgene?全血RNA 采xue管（BD, 762165）。該采xue管含有能穩(wěn)定 RNA 的專有試劑，能產(chǎn)生準(zhǔn)確反映采樣時血液狀態(tài)的基因表達(dá)數(shù)據(jù)。

更重要的一點(diǎn)，采xue管的樣本儲藏時間及RNA質(zhì)量的穩(wěn)定性，是大型多中心臨床研究的一個關(guān)鍵考慮因素。PAXgene全血RNA保存管（762165）內(nèi)含能夠穩(wěn)定體內(nèi)基因轉(zhuǎn)錄性狀的抗凝劑。抗凝劑能夠減少RNA在體外的降解，穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)的RNA，并將基因誘導(dǎo)的水平降低到最小程度，被廣泛用于血液RNA樣本的保存。相關(guān)實(shí)驗(yàn)證明，PAXgene? 全血RNA 采xue管中樣本在-80℃儲存7年后 ，提取的RNA 質(zhì)量與產(chǎn)量均較穩(wěn)定，樣本在-20℃中儲存11年后，RNA 質(zhì)量與采集當(dāng)天相比沒有降低。

RNA-seq

PAXgene? 血液RNA管附帶有配套的RNA提取方案（Qiagen，cat.762331），也可以使用不同的RNA提取方案進(jìn)行分離，例如使用苯·酚/氯仿提取，或與血液樣本兼容的其他方案。

細(xì)胞壁被破壞后，裂解液中不僅含有RNA，還含有DNA和蛋白質(zhì)?；蚪MDNA（gDNA）是"雜質(zhì)"之一，會在數(shù)據(jù)分析步驟中造成偏差和定量問題。然而，由于血細(xì)胞中DNA的含量高于RNA，一般會對從血液中分離出來的RNA使用DNase進(jìn)行處理。

在開始制備RNA-Seq文庫之前，是否需要進(jìn)行任何RNA 預(yù)處理在很大程度上取決于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、所選文庫預(yù)處理和樣本類型。在從血液中分離出的RNA樣本中，有兩個重要的"雜質(zhì)"占據(jù)了很大的測序空間，它們是珠蛋白mRNA和核糖體RNA（rRNA）。

紅細(xì)胞中的珠蛋白mRNA量可占樣本中所有mRNA的 30-80%，而rRNA 則占總RNA的80-90 %。在mRNA-Seq實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過poly(A)選擇后，這些轉(zhuǎn)錄本會消耗很大比例的測序讀數(shù)。此外，它們還影響了對血液轉(zhuǎn)錄譜的分析。

另外，如下圖所示，在沒有珠蛋白耗竭的情況下，基因檢測率會降低。從血液中分離的RNA樣本中去除rRNA及珠蛋白mRNA，可釋放出更多寶貴的測序空間，并將測序讀數(shù)集中到最重要的部分。

全血是一種珍貴、易得的樣本類型，也是制備血液RNA-Seq的樣本。不同的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和RNA-Seq類型，從全血中獲取高質(zhì)量RNA-Seq數(shù)據(jù)的步驟會有所不同。無論選擇哪種方法，優(yōu)良實(shí)踐建議都是在采樣后立即滅活RNase以防止RNA降解；用DNase處理RNA樣品以去除gDNA，去除球蛋白mRNA以提高基因檢測率，如果是mRNA-Seq或總RNA-Seq，則同時去除rRNA，以釋放額外的測序空間。

實(shí)驗(yàn)小貼士：少走彎路更高效嚴(yán)格操作規(guī)范：RNA-seq實(shí)驗(yàn)中稍有不慎便會影響結(jié)果，請確保每一步均符合標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。批量處理樣本：為減少批次間誤差，建議一次性處理多個樣本，統(tǒng)一條件操作。數(shù)據(jù)備份：測序數(shù)據(jù)是寶貴資產(chǎn)，請及時備份以防丟失。

產(chǎn)品推薦：提升實(shí)驗(yàn)效率的必·備選擇

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血液RNA-seq實(shí)驗(yàn)盡管復(fù)雜，但通過合理的試劑選擇、優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)流程以及科學(xué)的數(shù)據(jù)分析，您一定能獲得高質(zhì)量的研究成果！想了解更多實(shí)驗(yàn)方案或購買相關(guān)試劑，請聯(lián)系【華雅思創(chuàng)生物】，我們致力于為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品與技術(shù)支持！

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