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免疫印跡封閉液
在WB實(shí)驗(yàn)過程中，我們常常會提到封閉液的使用問題。我們會使用到封閉液的原因是因?yàn)?/span>在電泳轉(zhuǎn)膜后，膜上其它沒有結(jié)合蛋白質(zhì)的空白位置需要用封閉液加以封閉，以避免非特異性結(jié)合。而Western Blotting的靈敏度，特異性在很大程度取決于封閉的好壞。過度的封閉導(dǎo)致抗原表位的遮蔽，從而降低檢測靈敏度。不*封閉又會導(dǎo)致zui終背景增高或信噪比太低。zui常用的封閉液是脫脂奶粉，由于脫脂奶粉的成分比較復(fù)雜，里面微量的生物素或堿性磷酸酶就可能造成背景的污染而不太適合生物素－親和素檢測和堿性磷酸酶底物檢測系統(tǒng)。另外，脫脂奶粉里的其它微量蛋白質(zhì)有可能和待檢測抗原有相似的抗體識別表位而造成交叉反應(yīng)。還有的實(shí)驗(yàn)室也會用到BSA和CASEIN，這兩種蛋白的溶液的封閉效果總體來說要比脫脂奶粉要好些，但是由于每個實(shí)驗(yàn)室人工配置溶液的不穩(wěn)定因素，zui后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也存在了批間差異的問題。而KPL公司生產(chǎn)的Detector Block™就可以解決這個問題。下圖是幾種封閉液對比實(shí)驗(yàn)
從圖中可以看出，脫脂奶粉封閉的效果是zui不好的，不僅靈敏度很低，而且背景比較高，BSA和Casein的封閉效果是差不多的，而，KPL公司的成品Detector Block™則背景比較低，而且靈敏度很高，這樣的封閉液對于對靈敏度需求比較高的客戶，以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果需要清晰圖片發(fā)文章的客戶來說，是個不錯的選擇，另外，對了試劑盒生產(chǎn)廠家，購買成品的封閉液，有利于產(chǎn)品的穩(wěn)定性的提高。
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