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上新 | 翌圣酵母表達(dá)DNase l，告別RNA提取中的DNA污染困擾！
在基因表達(dá)分析領(lǐng)域，基因組DNA污染可謂RNA定量過程中的“隱形殺手”。即便RNA樣本中僅存在微量的基因組DNA殘留，也極有可能使qPCR的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生顯著偏差。因此，如何消除RNA樣本中的基因組DNA干擾，同時(shí)又不影響RNA定量的準(zhǔn)確性，一直是科研人員面臨的重大技術(shù)難題。
DNase I（脫氧核糖核酸酶 I）作為解決這一難題的黃金標(biāo)準(zhǔn)，憑借的雙鏈/單鏈DNA消化能力，在RNA研究中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。
DNase I簡(jiǎn)介
DNase I是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA的非特異性核酸內(nèi)切酶。它能夠水解磷酸二酯鍵，產(chǎn)生含有5'-磷酸基團(tuán)和3'-OH基團(tuán)的單脫氧核苷酸和寡脫氧核苷酸。DNase I最佳的工作pH范圍是7-8，其活性依賴于Ca2+，并可被二價(jià)金屬離子如Mn2+，Mg2+，Zn2+等激活。在Mg2+存在條件下，DNase I 隨機(jī)剪切雙鏈DNA的任意位點(diǎn)；Mn2+存在條件下，DNase I可在同一位點(diǎn)剪切DNA雙鏈，形成平末端，或1-2個(gè)核苷酸突出的粘末端。
圖1. DNase I在Mg2+以及Mn2+存在下可切割dsDNA原理圖
傳統(tǒng)DNase I技術(shù)正面臨難以突破的困境：牛胰提取法因原料來(lái)源復(fù)雜，RNase殘留問題突出，純化過程不僅繁瑣，且難以保證產(chǎn)品均一性；大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)則受制于生物合成機(jī)制，面臨產(chǎn)量天花板問題。
翌圣生物直擊行業(yè)痛點(diǎn)，重磅推出酵母表達(dá)Recombinant DNase I (RNase-free, Yeast) (Cat#14549/14550)，依托真核表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)，實(shí)現(xiàn)兩大核心技術(shù)突破：
產(chǎn)能突破：運(yùn)用真核分泌表達(dá)技術(shù)，有效避免胞內(nèi)毒素積累，同時(shí)搭配高密度發(fā)酵工藝，多方位提升產(chǎn)能，滿足大規(guī)模生產(chǎn)需求；
性能升級(jí)：得益于酵母體系天然的糖基化修飾，賦予酶更穩(wěn)定的空間結(jié)構(gòu)，即使在復(fù)雜樣本環(huán)境中，依然能夠高效地消化DNA。
數(shù)據(jù)展示
Recombinant DNase I (RNase-free, Yeast) (Cat#14549/14550)
消化活性，媲美進(jìn)口品質(zhì)
分別使用不同投入量的翌圣及進(jìn)口品牌Supplier A的DNase I對(duì)1 μg質(zhì)粒DNA進(jìn)行消化處理，結(jié)果顯示翌圣14549ES對(duì)質(zhì)粒DNA去除效率媲美Supplier A。
圖2.質(zhì)粒DNA去除效果驗(yàn)證
無(wú)RNase殘留
取10 U翌圣生物Recombinant DNase I (RNase-free, Yeast) (Cat#14549)與RNA底物于37℃孵育1 h，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析顯示，三個(gè)批次的該酶制劑均未檢出RNase活性殘留，消除RNA樣本降解風(fēng)險(xiǎn)，為對(duì)純度要求的RNA分析場(chǎng)景提供可靠保障。
圖3.RNase殘留結(jié)果驗(yàn)證
RNA提取應(yīng)用驗(yàn)證
為評(píng)估翌圣生物Recombinant DNase I (RNase-free, Yeast) (Cat#14549)在RNA提取中的應(yīng)用效果，取20 U該酶制劑處理12例不同來(lái)源的小鼠肝臟前處理樣本。經(jīng)后續(xù)RNA提取及瓊脂糖凝膠電泳分析證實(shí)，該酶處理組RNA完整性良好，表明此DNase I在有效消化DNA的同時(shí)，不會(huì)對(duì)RNA質(zhì)量產(chǎn)生影響，滿足RNA提取實(shí)驗(yàn)的技術(shù)要求。
圖4.RNA提取應(yīng)用驗(yàn)證
翌圣DNase I 選擇指南
Description | Catalog No. | Application |
提取自牛胰腺，經(jīng)色譜工藝制備，核糖核酸酶A（RNase A）活性含量極低。為凍干粉劑。 | 10607ES | 1、從樣本中提取RNA時(shí)去除gDNA。（如果是微量樣本，需要用重組來(lái)源的DNase I）。 2、蛋白質(zhì)研究: 從蛋白制備物中去除DNA。 |
提取自牛胰腺，經(jīng)色譜工藝制備，核糖核酸酶A（RNase A）活性含量極低（≤0.0005%）。為凍干粉劑。 | 10608ES | |
大腸桿菌重組表達(dá)DNase I (RNase-free)，大腸桿菌重組表達(dá)，不含RNase，液體形式。 | 10325ES | 適用于各種應(yīng)用：RNA提取過程中的基因組DNA去除、反轉(zhuǎn)錄前的基因組DNA清除、體外轉(zhuǎn)錄后模板DNA的消化、RNA建庫(kù)過程中rRNA去除、缺口平移法進(jìn)行DNA標(biāo)記、DNase I足跡法分析實(shí)驗(yàn)、需要避免動(dòng)物源成分的應(yīng)用場(chǎng)景等。 |
畢赤酵母重組表達(dá)DNase I (RNase-free)，不含RNase，液體形式。 | 14549ES | |
14550ES | ||
大腸桿菌重組表達(dá)DNase I (RNase-free)，GMP-grade，液體形式。 | 10611ES | GMP藥用級(jí)別。用于采用藥用規(guī)格原輔料生產(chǎn)，符合GMP規(guī)范的產(chǎn)品生產(chǎn)與質(zhì)量管理規(guī)程保障生產(chǎn)過程及所有原輔料可追溯。 |
參考文獻(xiàn)
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