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ITC等溫滴定量熱儀是一種用于測量生物分子相互作用（如酶-底物、抗體-抗原、核酸-配體等）的熱力學參數(shù)的精密儀器。
以下是ITC等溫滴定量熱儀實驗操作步驟：
1. 加載樣品
滴定池（Sample Cell）：
加入受體溶液（如蛋白質或核酸溶液）。
注射器（Syringe）：
吸入配體溶液（如底物或抑制劑），確保無氣泡，安裝到注射器模塊。
2. 開始滴定
基線穩(wěn)定：
啟動儀器，等待基線穩(wěn)定。
初始滴定：
執(zhí)行一次大體積滴定，觀察信號響應，檢查是否漏液或堵塞。
正式滴定：
按設定參數(shù)逐滴滴定，記錄每次滴定后的熱量變化。
觀察信號峰值和回歸基線情況，避免過載或飽和。
3. 數(shù)據采集
實時監(jiān)控：
觀察軟件中的原始滴定曲線，確保信號正常（如峰形對稱、無異常噪聲）。
保存數(shù)據：
實驗結束后保存原始數(shù)據文件，備份至本地或云端。
二、ITC等溫滴定量熱儀實驗后處理：
1. 清洗儀器
沖洗注射器和滴定池：
用超純水或緩沖液多次沖洗，去除殘留樣品。
拆卸注射器，用專用工具清洗活塞和密封圈，避免堵塞。
干燥與維護：
擦干儀器表面，定期檢查攪拌子、溫度傳感器和電路連接。
2. 數(shù)據分析
擬合模型：
使用分析軟件對原始數(shù)據進行擬合。
選擇合適模型（如單一站點結合模型、多站點模型或異構結合模型）。
參數(shù)提取：
結合常數(shù)（Ka）：反映配體與受體的結合親和力。
焓變（ΔH）：結合過程的熱量變化（正值為放熱，負值為吸熱）。
熵變（ΔS）和吉布斯自由能（ΔG）：通過范特霍夫方程計算。
化學計量數(shù)（n）：配體與受體的結合比例。
3. 結果驗證
重復實驗：
重復至少3次獨立實驗，確保數(shù)據一致性。
對照實驗：
設置空白對照（如緩沖液滴定緩沖液），排除非特異性信號。
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