百歐博偉生物：在微生物檢測中，遇到異常現(xiàn)象平板（如菌落過度蔓延、污染、菌落形態(tài)異常或培養(yǎng)基異常等）時，需采用特殊方法進行菌落計數(shù)。以下是具體處理步驟和注意事項：

一、確認異常現(xiàn)象類型

1、菌落過度蔓延

現(xiàn)象：菌落連成一片，無法區(qū)分單個菌落。

原因：菌種擴散性強（如變形桿菌）、培養(yǎng)基過濕、接種量過大。

2、菌落形態(tài)異常

現(xiàn)象：目標(biāo)菌與非目標(biāo)菌形態(tài)差異大（可能為污染）。

3、培養(yǎng)基異常

現(xiàn)象：培養(yǎng)基變色、渾濁、沉淀或干裂。

4、菌落密度異常

現(xiàn)象：菌落過密（>300 CFU/平板）或過疏（<10 CFU/平板）。

二、異常平板的處理與計數(shù)方法

1、菌落過度蔓延

分區(qū)計數(shù)法：

選擇蔓延區(qū)域邊緣的分散菌落進行計數(shù)，僅統(tǒng)計獨立菌落。

若蔓延區(qū)域占平板面積>50%，需報告為“蔓延菌落”（TMTC：Too Many To Count），并重新稀釋樣品。

表面滅菌法（特定菌種）：

覆蓋一層無菌瓊脂（45-50℃）固定菌落，冷卻后計數(shù)下層分散菌落。

2、疑似污染或菌落形態(tài)異常

選擇性培養(yǎng)基驗證：

將可疑菌落轉(zhuǎn)接到選擇性培養(yǎng)基（如EMB、SS瓊脂）確認是否為非目標(biāo)菌。

染色鑒定：

使用革蘭染色、芽孢染色等輔助判斷，排除污染菌。

計數(shù)原則：

僅計數(shù)符合目標(biāo)菌特征的菌落，其余標(biāo)記為污染并記錄。

3、培養(yǎng)基異常

物理干擾（如沉淀）：

使用立體顯微鏡或傾斜平板觀察，排除沉淀干擾。

化學(xué)干擾（如顏色變化）：

通過空白對照比對，確認是否為菌落代謝產(chǎn)物導(dǎo)致的變色。

4、高密度或低密度菌落

高密度（>300 CFU）：

報告為“不可計數(shù)”，選擇更高稀釋度的平板重新計數(shù)。

低密度（<10 CFU）：

結(jié)合多個稀釋度計算加權(quán)平均值，或按檢測下限報告（如“<10 CFU/mL”）。

三、特殊情況處理

1、菌落重疊但可辨：

統(tǒng)計所有可見獨立菌落，相鄰菌落間距<2 mm時按1個計算。

2、鏈狀菌落：

視為單個菌落（除非明顯由多個菌體形成）。

3、微型菌落（<0.5 mm）：

使用立體顯微鏡（10-15倍放大）輔助計數(shù)。

四、記錄與報告

1、明確標(biāo)注異?，F(xiàn)象：

記錄平板狀態(tài)（如“蔓延生長”“疑似污染”）。

2、計算公式調(diào)整：

若僅部分稀釋度可用，需注明數(shù)據(jù)來源（如“基于10??稀釋度計數(shù)”）。

3、結(jié)果有效性說明：

異常平板數(shù)據(jù)需備注可能誤差，必要時重新實驗。

五、預(yù)防措施

優(yōu)化稀釋度：對未知樣品進行梯度稀釋（建議3個連續(xù)稀釋度）。

控制接種量：確保每平板菌落數(shù)在30-300 CFU之間。

使用抑制擴散劑：添加TTC（氯化三苯基四氮唑）或0.1%脫氧膽酸鈉抑制蔓延。

嚴格無菌操作：避免污染導(dǎo)致的假陽性/陰性。

六、注意事項

若異常平板無法準(zhǔn)確計數(shù)，需重新制備樣品并復(fù)測。

參考標(biāo)準(zhǔn)：遵循ISO 7218、FDA BAM或?qū)嶒炇覂?nèi)部SOP要求。

通過以上方法，可在異常情況下限度保證菌落計數(shù)的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。

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