在基因克隆、載體構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)中，限制性內(nèi)切酶是核心工具，但傳統(tǒng)酶存在三大瓶頸：

1. 耗時(shí)低效：需 30 分鐘 - 2 小時(shí)酶切，且需提前孵育緩沖液；

2. 多步換液：酶切后需純化或更換 Buffer 才能進(jìn)行去磷酸化 / 連接，增加污染風(fēng)險(xiǎn)；

3. 兼容性差：不同品牌試劑緩沖體系不統(tǒng)一，常導(dǎo)致反應(yīng)效率下降（如連接效率降低 40%）。

LightNing® 快速內(nèi)切酶通過基因工程改造酶蛋白 + 優(yōu)化緩沖體系，系統(tǒng)性解決上述問題，尤其適合高通量克?。ㄈ巛d體庫構(gòu)建、基因突變分析）。

二、LightNing® 核心技術(shù)優(yōu)勢(shì)：三大革新提升實(shí)驗(yàn)效率

1. 超速酶切：5 分鐘完成質(zhì)粒酶切（傳統(tǒng)酶需 30 分鐘）

· 工程化改造：通過定向進(jìn)化技術(shù)優(yōu)化酶 - 底物結(jié)合位點(diǎn)，催化效率提升 5 倍，5 分鐘內(nèi)酶切效率≥95%（SDS-PAGE 驗(yàn)證）；

· 適用范圍廣：兼容質(zhì)粒 DNA（1μg）、PCR 產(chǎn)物（500bp-10kb）、基因組 DNA（哺乳動(dòng)物 / 植物源），推薦酶用量?jī)H 0.5μL / 反應(yīng)。

2. 單 Buffer 通吃：CutOne® 體系支持 “酶切 - 修飾 - 連接” 一管化

· 緩沖液：CutOne®/CutOne® Color Buffer（含可視化染料）含 Mg2+/ATP 等多酶協(xié)同因子，確保：
? 內(nèi)切酶活性：37℃下 15 分鐘完成難切位點(diǎn)（如 GC-rich 區(qū)域）酶切；
? 去磷酸化活性：CIAP / 蝦堿性磷酸酶在 CutOne® 中活性達(dá) 100%（傳統(tǒng) Buffer 僅 70%）；
? 連接效率：T4 DNA 連接酶在 CutOne® 中 25℃ 10 分鐘完成黏性末端連接，效率比傳統(tǒng)體系提升 20%。

3. 高性價(jià)比：50 + 常用酶覆蓋 95% 分子克隆需求

三、標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)流程：從酶切到連接只需 3 步

Step 1：體系配置（5 分鐘）

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DNA模板（1μg） 5μL

CutOne® Buffer 2μL

LightNing®酶 0.5μL

ddH2O補(bǔ)至 20μL

· 無需預(yù)混 Buffer，直接按體積比添加（酶體積≤反應(yīng)體系 5%）；

· CutOne® Color Buffer 含藍(lán)色染料，可直接上樣電泳觀察酶切進(jìn)度。

Step 2：酶切反應(yīng)（5-15 分鐘）

· 37℃孵育 5 分鐘（普通位點(diǎn)）或 15 分鐘（難切位點(diǎn)），無需熱啟動(dòng)；

· 支持室溫（25℃）酶切（如 NotI 等冷敏感酶），適合野外或無溫控場(chǎng)景。

Step 3：一管化修飾 / 連接（10 分鐘）

· 去磷酸化：直接添加 CIAP（1U），37℃ 5 分鐘滅活內(nèi)切酶同時(shí)去磷酸化；

· 連接反應(yīng)：添加 T4 連接酶（1μL）及 ATP（終濃度 1mM），25℃ 10 分鐘完成連接。

對(duì)比傳統(tǒng)流程：總耗時(shí)從≥60 分鐘縮短至≤30 分鐘，減少 2 次離心換液步驟，污染風(fēng)險(xiǎn)降低 70%。

四、目標(biāo)客戶與場(chǎng)景適配

1. 科研實(shí)驗(yàn)室（高校 / 研究所）

· 痛點(diǎn)：碩士 / 博士需同時(shí)處理多個(gè)克隆項(xiàng)目，時(shí)間成本高；

· 解決方案：LightNing® 50μL 小規(guī)格包裝（適合少量多次實(shí)驗(yàn)），搭配免費(fèi) Protocol（含 CRISPR 載體構(gòu)建案例）。

2. 生物制藥企業(yè)（工藝開發(fā)）

· 需求：GMP 級(jí)酶需批次穩(wěn)定性高、兼容性強(qiáng)；

· 產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：提供 1mL/5mL 工業(yè)級(jí)包裝，每批次通過 STR 基因分型及酶活一致性檢測(cè)（變異系數(shù)＜5%）。

3. 分子診斷公司（試劑盒開發(fā)）

· 核心訴求：試劑需適配自動(dòng)化平臺(tái)（如移液工作站）；

· 技術(shù)優(yōu)勢(shì)：CutOne® Buffer 黏度低（2.3cP），適合機(jī)械臂精準(zhǔn)加樣，已通過 Beckman Coulter 平臺(tái)兼容性測(cè)試。

五、選購與技術(shù)支持

1. 產(chǎn)品參數(shù)

· 保存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融（建議分裝 5μL / 管）；

· 運(yùn)輸條件：冰袋冷藏運(yùn)輸（4℃可穩(wěn)定 72 小時(shí)）；

· 質(zhì)檢報(bào)告：每批次提供酶切效率（≥95%）、內(nèi)毒素（＜10EU/mL）、支原體檢測(cè)報(bào)告。

2. 增值服務(wù)

· 免費(fèi)酶切位點(diǎn)分析：提供載體序列，技術(shù)團(tuán)隊(duì) 24 小時(shí)內(nèi)反饋?zhàn)罴衙盖蟹桨福?/p>

· 定制化開發(fā)：支持稀有酶（如 I-SceI、AscI）工程化改造，周期 4-6 周。

六、數(shù)據(jù)驗(yàn)證：第三方實(shí)驗(yàn)室效果對(duì)比

LightNing®   快速內(nèi)切酶通過 “超速酶切 + 單 Buffer 兼容” 技術(shù)，重新定義分子克隆效率標(biāo)準(zhǔn)，尤其適合需要高頻酶切連接的實(shí)驗(yàn)（如載體構(gòu)建、基因突變篩選）。蘇州阿爾法生物提供的試劑從常用酶到稀有酶的全產(chǎn)品線，搭配 CutOne® Buffer 一站式解決方案，助力科研與工業(yè)用戶突破傳統(tǒng)酶切瓶頸。