空白對照的定義及其在ELISA測定中的應用

空白對照是指在實驗設計中設置的一種陰性對照，旨在監(jiān)測非特異性背景信號，并為基線吸光度值提供參考。在酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）中，通過引入空白對照，可以有效識別并扣除樣品讀數(shù)中的背景噪聲，從而提高檢測結(jié)果的準確性。然而，在多分析物ELISA測定中，由于其固有的高背景信號特性，這種標準化方法可能并不適用。本文將詳細探討為何在Cygnus的ELISA測定中通常不建議使用空白對照。

減去背景值對多分析物ELISA檢測結(jié)果的影響

在多分析物ELISA測定中，如HCP ELISA，由于HCP抗體的復雜性，其背景信號通常較高。這使得此類檢測的基線吸光度值（OD值）普遍高于簡單的單分析物檢測。從統(tǒng)計學角度來看，從樣品讀數(shù)中減去較高的基線OD值可能會增加數(shù)據(jù)的變異程度，從而影響結(jié)果的準確性和可靠性。

以下示例說明了背景值扣除對變異系數(shù)的影響。在表1中，標準A的平均OD值為0.100，標準B的平均OD值為0.150 。當通過原始讀數(shù)減去空白對照的OD值來計算變異系數(shù)（CV）時，CV值顯著上升，導致標準B的CV%從6.7%增加至20%。

表1. 背景值扣除對變異系數(shù)的影響

檢測背景值越高，對變異系數(shù)百分比的影響就越大。

表2展示了8種不同ELISA試劑盒在10組隨機數(shù)據(jù)集中的平均變異系數(shù)（CV%）?；谠糘D值計算得出的CV%范圍為10%至20%，而經(jīng)過空白對照校正后的相同數(shù)據(jù)CV%則超過了20%。在所有情況下，經(jīng)過空白對照校正后的CV%均高于未校正的數(shù)據(jù)。在實際應用中，分析數(shù)據(jù)放行的標準通常要求重復檢測的CV%不超過20%，上述差異可能直接導致分析結(jié)果無法滿足精密度要求，從長遠來看，引入空白對照將直接導致測試結(jié)果無法符合放行要求。

表2. 經(jīng)過空白對照校正后的CV%與未校正數(shù)據(jù)的CV%值對比

從統(tǒng)計學角度來看，空白對照的OD值越高，出現(xiàn)此類問題的可能性就越大。

鑒于上述原因，Cygnus Technologies 致力于開發(fā)和提供無需背景校正的 ELISA 試劑盒。在我們已上市的 ELISA 試劑盒開發(fā)、分析及測試過程中，從未在批次放行的工作流程中引入空白對照校正步驟。相反，我們使用 0 ng/mL 標準品來設定 Y 軸截距并確定標準曲線的下限。因此，如果您在實驗流程中加入了空白對照校正步驟，其獲得的檢測變異系數(shù)（CV）百分比很可能會高于 Cygnus 質(zhì)控團隊所記錄的結(jié)果。Cygnus針對每一種檢測試劑盒均提供相應的QS（Qualification Summary）文件，如有需求歡迎點擊這里填寫信息索取，或直接聯(lián)系Cygnus中國總代理西美杰。如您在使用Cygnus HCP ELISA試劑盒的過程中遇到任何問題，我們的技術(shù)支持團隊將竭誠為您提供解決方案和建議。