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【專家訪談】激光顯微切割技術(shù)如何助力神經(jīng)科學(xué)研究取得開創(chuàng)性進展？
采訪瑪爾塔·帕特林尼博士（Dr. Marta Paterlini），探討使用激光顯微切割（LMD）技術(shù)研究成人神經(jīng)發(fā)生（adult neurogenesis）及其在空間蛋白質(zhì)組學(xué)和精準醫(yī)學(xué)中的未來潛力。
瑪爾塔·帕特林尼博士，卡羅林斯卡學(xué)院的高級科學(xué)家，分享了她在成人人類神經(jīng)發(fā)生開創(chuàng)性研究中使用激光顯微切割（LMD）的經(jīng)驗，并提供了關(guān)于LMD在空間蛋白質(zhì)組學(xué)和精準醫(yī)學(xué)中未來應(yīng)用潛力的個人見解。
關(guān)鍵收獲
確認成人神經(jīng)發(fā)生存在的突破性實驗
LMD如何使得在單細胞水平上研究復(fù)雜過程成為可能
LMD在空間生物學(xué)中的未來前景
觀看采訪
采訪總結(jié)
理解成人人類神經(jīng)發(fā)生
發(fā)育生物學(xué)和再生醫(yī)學(xué)的核心挑戰(zhàn)之一是理解細胞的起源，尤其是人腦中新的神經(jīng)元。幾十年來，人們一直認為神經(jīng)元形成（神經(jīng)發(fā)生）只發(fā)生在胚胎階段，出生后就會停止。然而，越來越多的有力證據(jù)，包括來自瑪爾塔·帕特林尼博士在喬納斯·弗里森實驗室的研究發(fā)現(xiàn)，已經(jīng)證實了成人人類大腦中存在神經(jīng)發(fā)生——這一過程被稱為成人神經(jīng)發(fā)生。
成人人類神經(jīng)發(fā)生在海馬體中發(fā)生，涉及干細胞分裂成神經(jīng)前體細胞，然后這些神經(jīng)前體細胞隨后發(fā)育成神經(jīng)元。這一發(fā)現(xiàn)引發(fā)了許多關(guān)于神經(jīng)干細胞/神經(jīng)前體細胞的身份和它們周轉(zhuǎn)率的問題，其中一些問題瑪爾塔的研究組已經(jīng)能夠使用激光顯微切割（LMD）來解答。
在單細胞水平研究復(fù)雜系統(tǒng)
當瑪爾塔加入喬納斯·弗里森實驗室時，他們的目標是理解從干細胞到成人樣本中成熟神經(jīng)元的亞型分化。當時，單細胞基因組學(xué)正逐漸興起，他們的實驗室是shou批與其他測序?qū)嶒炇液献鞑捎脝渭毎夹g(shù)的實驗室之一。
由于研究像人腦這樣的復(fù)雜系統(tǒng)會非常具有挑戰(zhàn)性，團隊希望測試使用單細胞基因組學(xué)流程來定義人類細胞譜系追蹤（從干細胞到成熟神經(jīng)元）的方法，因為已知單個細胞中體細胞變異的分布可以反映系統(tǒng)發(fā)育軌跡。該團隊意識到，一個重要的原理證明可以是追溯初級成纖維細胞系的分裂。這時，他們轉(zhuǎn)向了徠卡顯微系統(tǒng)公司的LMD系統(tǒng)，該系統(tǒng)將在這一研究中發(fā)揮重要作用。
LMD的關(guān)鍵作用
在一項發(fā)表于《基因組生物學(xué)》（Genome Biology）的顯著實驗中，成纖維細胞在LMD系統(tǒng)的金屬框架上生長。細胞被允許附著，并通過時間延遲成像記錄其分裂。通過這種方式，研究團隊成功捕獲了分裂后的子細胞，并利用LMD技術(shù)進行了收集。為了分析這些單細胞的DNA序列數(shù)據(jù)，研究團隊采用了一種他們開發(fā)的生物信息學(xué)工具，以非監(jiān)督的方式識別了體細胞中的突變。這一實驗展示了將單細胞基因組學(xué)與LMD系統(tǒng)相結(jié)合的強大功能，這對于構(gòu)建細胞流程、追蹤細胞譜系以及深入了解成人神經(jīng)發(fā)生至關(guān)重要。
視頻：在金屬框架上生長的成纖維細胞。這些細胞被允許附著在框架上，并通過延時成像技術(shù)記錄了它們的分裂過程，之后捕獲了分裂出的子細胞，并使用激光顯微切割（LMD）技術(shù)進行了收集。
LMD的當前和未來前景
瑪爾塔稱自己是LMD系統(tǒng)的“忠實粉絲”，尤其對其在單細胞水平上工作的能力印象深刻，這對她的團隊在神經(jīng)發(fā)生不同階段捕獲單個細胞至關(guān)重要。他們與部門內(nèi)的其他研究人員共享LMD系統(tǒng)，并近期注意到該系統(tǒng)在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的應(yīng)用興趣激增。
未來應(yīng)用：蛋白質(zhì)組學(xué)和空間生物學(xué)
展望未來，瑪爾塔認為LMD系統(tǒng)在蛋白質(zhì)組學(xué)中扮演著重要角色，尤其是與質(zhì)譜技術(shù)結(jié)合使用時。她觀察到，使用LMD進行蛋白質(zhì)組學(xué)研究也可能是她的團隊在定義健康和疾病樣本中細胞功能和異質(zhì)性方面的下一步。這將與他們對精準醫(yī)學(xué)的興趣和目標保持一致。意識到空間生物學(xué)的發(fā)展趨勢，瑪爾塔還評論說，LMD系統(tǒng)將在不斷發(fā)展的空間蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域中發(fā)揮重要作用，為測序提供精確的切片。
結(jié) 論
LMD系統(tǒng)通過實現(xiàn)詳細的單細胞分析和促進創(chuàng)新實驗，在推動對成人人類神經(jīng)發(fā)生的理解方面發(fā)揮了關(guān)鍵作用。隨著研究的不斷發(fā)展，LMD系統(tǒng)在蛋白質(zhì)組學(xué)和空間生物學(xué)中的應(yīng)用有望為精準醫(yī)學(xué)帶來進一步的突破。
參考文獻：
1.Joanna H?rd, Ezeddin Al H?kim, Marie Kindblom, ?sa K. Bj?rklund, Ilke Demirci, Marta Paterlini, Pedro Reu, Bengt Sennblad, Erik Borgstr?m, Patrik L. St?hl, Jakob Michaelsson, Jeff E. Mold, Jonas Frisén. Conbase: a software for unsupervised discovery of clonal somatic mutations in single cells through read phasing. Genome Biol 2019 Apr 1;20(1):68. doi: 10.1186/s13059-019-1673-8.
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