人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體ELISA試劑盒對(duì)轉(zhuǎn)鐵蛋白的測定方法

來源：深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司 2024年08月06日 14:17

人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（TransferrinReceptor，TfR）ELISA試劑盒用于測定樣本中轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的含量，通常用于血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣品類型。下面是一般的操作步驟和測定方法：

1.準(zhǔn)備試劑和樣品

標(biāo)準(zhǔn)曲線：根據(jù)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品，制備一系列不同濃度的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體標(biāo)準(zhǔn)溶液。

樣品：準(zhǔn)備待測樣品，如血清、血漿等，根據(jù)需要進(jìn)行稀釋處理，以確保在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)能夠正確測量。

2.實(shí)驗(yàn)操作步驟

包被板：將微孔板的每個(gè)孔位用試劑盒提供的抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體（captureantibody）包被過夜（通常在4°C下）。

洗滌：使用洗滌緩沖液反復(fù)洗滌板子，以去除未結(jié)合的物質(zhì)。

添加樣品和標(biāo)準(zhǔn)品：

加入稀釋后的樣品和各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品到板中的不同孔位。

并列設(shè)置一個(gè)孔用作背景對(duì)照，只加入試劑盒提供的稀釋緩沖液。

孵育：在室溫下或者適當(dāng)溫度條件下孵育板子，使得轉(zhuǎn)鐵蛋白受體與抗體結(jié)合。

洗滌：將板子洗滌，以去除未結(jié)合的物質(zhì)。

添加檢測抗體：加入另一種標(biāo)記的抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體（detectionantibody），使其與板上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合。

再次孵育和洗滌：讓檢測抗體與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合，然后再次用洗滌緩沖液洗滌板子。

加入底物：加入底物溶液，使其與檢測抗體結(jié)合的復(fù)合物發(fā)生染色反應(yīng)。

停止反應(yīng)：加入停止溶液（通常為酸性溶液），停止染色反應(yīng)。

3.測量和數(shù)據(jù)分析

使用ELISA閱讀器測量每個(gè)孔位的吸光度（OD值）。

利用標(biāo)準(zhǔn)曲線上的各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并據(jù)此計(jì)算樣品中轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的濃度。

通過軟件或手動(dòng)計(jì)算，將各個(gè)樣品的OD值轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體濃度。

注意事項(xiàng)

標(biāo)準(zhǔn)曲線：確保標(biāo)準(zhǔn)曲線的各個(gè)點(diǎn)位都在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，并且有合適的線性關(guān)系。

重復(fù)性：重復(fù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以驗(yàn)證結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。

控制：始終包括背景對(duì)照和質(zhì)量控制，確保試劑盒的性能和操作的準(zhǔn)確性。

通過以上步驟，人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體ELISA試劑盒可以可靠地用于測定樣本中轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的含量，這對(duì)于研究細(xì)胞表面受體的表達(dá)和其在生理和病理過程中的作用具有重要意義。

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