DsRed 2橙色熒光蛋白(應(yīng)用于啟動子活性監(jiān)測)
啟動子能特異性識別與RNA聚合酶結(jié)合,使之與模板DNA準(zhǔn)確地相結(jié)合并具有轉(zhuǎn)錄起始的特異性;轉(zhuǎn)錄因子(TFs)調(diào)節(jié)基因表達(dá),保證目的基因以特定的強(qiáng)度在特定的時(shí)間與空間表達(dá)的蛋白質(zhì)分子。
熒光素酶是自然中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶,其最有代表性的就算螢火蟲熒光素酶(firefly Luciferase)和海腎熒光素酶( Renilla Luciferase )。在熒光素酶的催化下,熒光素底物發(fā)生氧化反應(yīng),從而產(chǎn)生熒光。通常其中一個(gè)熒光素酶基因作為報(bào)告基因,用于指示不同處理?xiàng)l件下基因的表達(dá)情況。而另一個(gè)作為內(nèi)參對照,即表達(dá)量基本恒定,用于減少內(nèi)在變化因素對于實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性的影響,比如細(xì)胞數(shù)目及活力的差異,細(xì)胞轉(zhuǎn)染及裂解效率。
結(jié)合雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng),將啟動子DNA序列插入到報(bào)告基因載體(常用載體為pGL3-Basic Vector,將待檢測的啟動子序列構(gòu)建在報(bào)告基因上游),若該DNA片段具有啟動子活性,則可以測到相應(yīng)的雙熒光素酶熒光值。
GFP“進(jìn)化”的同時(shí),研究人員開始修飾原始DsRed,以克服它的結(jié)構(gòu)缺陷。第二代DsRed,即DsRed2,經(jīng)過突變改造后,熒光蛋白的寡聚物形成趨勢減弱,蛋白成熟速度加快,并減少了發(fā)射綠光的中間載物臺。之后進(jìn)一步誘變將產(chǎn)生紅色熒光蛋白,而這種熒光蛋白拋棄了四聚體狀態(tài),但會以犧牲部分量子產(chǎn)率(DsRed2的25%)為代價(jià)。Tsien 等人研究出了單體紅色熒光蛋白,這種熒光蛋白被稱為 mRFP1。
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DsRed-Express(T1)橙色熒光蛋白(應(yīng)用于細(xì)胞標(biāo)記、成像)
DsRed橙色熒光蛋白單體
mTangerine橙色熒光蛋白
紅色熒光蛋白TagRFP
TagRFP 158T紅色熒光蛋白
mRuby熒光蛋白(紅色)
mCherry紅色熒光蛋白(應(yīng)用于蛋白質(zhì)融合表達(dá))
mApple熒光蛋白(紅色)
以上資料來自小編MSQ,2023.09.28
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