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電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的步驟
電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)：電化學(xué)發(fā)光（electro－chemiluminescence，ECL)是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，實(shí)際上包括了電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個(gè)過(guò)程。化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)3]2和電子供體三丙胺（TPA）在陽(yáng)電極表面同時(shí)各失去一個(gè)電子發(fā)生氧化反應(yīng)。二價(jià)的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三價(jià)，后者是一種強(qiáng)氧化劑。TPA被氧化成陽(yáng)離子自由基TPA+*，后者很不穩(wěn)定，自發(fā)地失去一個(gè)質(zhì)子（H+），形成自由基TPA*，這是一種非常強(qiáng)的還原劑。這兩個(gè)高反應(yīng)基團(tuán)在電極表面迅速反應(yīng)，三價(jià)的[Ru(bpy)3]3+被還原形成激發(fā)態(tài)的二價(jià)[Ru(bpy)3]2+*，能量來(lái)源于[Ru(bpy)3]3+和TPA*之間存在的高電化學(xué)電位差。TPA*自身被氧化成二丙胺和丙醛。接著激發(fā)態(tài)的 [Ru(bpy)3]2+*衰減成基態(tài)的[Ru(bpy)3]2+，同時(shí)發(fā)射一個(gè)波長(zhǎng)620nm的光子。這一過(guò)程在電極表面周而復(fù)始地進(jìn)行，產(chǎn)生許多光子，使光信號(hào)得以增強(qiáng)。
電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的步驟：
（1）將試管內(nèi)兩步反應(yīng)結(jié)束的反應(yīng)液輸入流動(dòng)池，由于磁鐵吸引，磁性微粒被吸著在電極上，其余反應(yīng)物流出流動(dòng)池，完成游離的和結(jié)合的標(biāo)記抗體的分離。
（2）將TPA溶液送入流動(dòng)池，將殘余的游離標(biāo)記抗體排出流動(dòng)池，在流動(dòng)池中充滿(mǎn)TPA溶液。
（3）撤下磁鐵，電極上通電，三聯(lián)吡啶釕與TPA發(fā)生電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，發(fā)出的光被光電倍增管收集，測(cè)定光強(qiáng)度。
（4）通過(guò)換算得出待測(cè)標(biāo)本中的抗原濃度。
（5）在流動(dòng)池中送入清洗液，將反應(yīng)物沖洗，即可測(cè)定下一個(gè)標(biāo)本。
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