GUS染色液用于生物化學活性分析、免疫分析以及組織和細胞的組織化學染色,多用于轉(zhuǎn)基因植物的GUS基因表達。GUS染色液是適宜的反應條件下,β-葡萄糖苷酶(GUS)可將X-Gluc水解成藍色物質(zhì),該物質(zhì)不溶解于轉(zhuǎn)基因的細胞核組織中的靛藍物質(zhì),具有GUS活性的部位或位點呈現(xiàn)藍色或藍色斑點,可用肉眼或顯微鏡觀察到。
GUS染色步驟:
1.預處理:將葉片、花瓣、根莖等組織剪成小片,放于1.5ml離心管中,加入預冷的90%丙酮覆蓋材料,常溫處理20-30分鐘。此步驟可以預固定組織并且可以去除部分葉綠素。
注:用于染色的植物材料的制備方法要因涉及的特定組織和器官的不同而異。例如,擬南芥的根、花和葉片以及煙草幼苗的根就可以不作任何預處理而直接染色。但是像煙草和馬鈴薯這些植物的莖和葉就必須在染色前切成薄片(1-3mm)。當操作大的組織和樣品時,可以選用真空滲入法來幫助底物滲入細胞。
2.染色:用蒸餾水將材料漂洗干凈后置于1.5ml離心管中;加入適量配制好的GUS染色工作液覆蓋材料;錫箔紙包好常溫過夜放置。
3.洗脫:用25%, 50% 70%, 95%乙醇梯度洗脫,搖床輕搖每次20分鐘。
4.觀察:肉眼或顯微鏡下觀察,白色背景上的藍色小點即為GUS表達位點。
當操作大的組織和樣品時可以選用真空滲入法來幫助底物和酶滲入細胞。
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的,應在授權范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關法律責任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關權利。