在大多數情況下,將基因轉染進入有絲分裂后期的神經細胞(如原核腦皮層核海馬趾神經細胞)被證實是無效的。其他轉染方法如磷脂鈣/DNA共沉淀法、陽離子脂質體法或顯微注射法等對神經細胞都是有毒的,他們通常導致被轉染的細胞存活率不到10,。經改良后的病毒轉染法,如腺病毒核Semilki forest病毒具有較高的轉染率,單病毒載體的構建是耗時的、并且伴有不安全的擔憂,病毒感染有可能感染蛋白質的合成,更有甚者,由于病毒轉導后蛋白表達的水平太高。
基因電轉染儀技術由兩部分組成:
1.轉染過程中,細胞首先懸浮在轉染試劑中,選擇相應的轉染程序,僅需數秒鐘,轉染結束,將細胞轉移到培養(yǎng)基中培養(yǎng)、觀察。針對不同的轉染細胞都有相應的轉染試劑,配合相應Amaxa轉染儀的程序,使DNA直接轉入細胞核內,轉染效率高,易操作,實驗周期短。
2.原理是基于細胞特異性的細胞核轉染液和電穿孔技術的結合。
細胞特異性的細胞核轉染液為外源基因進入細胞核提供友好界面,降低轉染過程對細胞的損傷。轉染技術有一般的電穿孔無法對比地優(yōu)點,它具有電子參數,每一套電子參數是作為一種程序去適應不同的細胞類型。由于電子參數是預先精心設計好的,因此操作者不用進行電子參數的優(yōu)化、轉染條件的摸索等繁瑣的工作,您只需按動按鈕選用規(guī)定的程序即可。
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