| 供貨周期 |
一個(gè)月 |
應(yīng)用領(lǐng)域 |
化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
人可替丁試劑盒用于檢測(cè)人樣本中可替丁含量，采用雙抗夾心 ELISA 法。操作有序，從樣本準(zhǔn)備到結(jié)果測(cè)定，需留意多項(xiàng)要點(diǎn)，保障檢測(cè)精準(zhǔn)。
人可替丁試劑盒介紹
人可替丁試劑盒，在醫(yī)學(xué)研究與臨床檢測(cè)中占據(jù)重要地位，主要用于精準(zhǔn)測(cè)定人血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中的可替丁含量?？商娑∽鳛橐活?lèi)抗菌肽，在人體先天性免疫防御體系里發(fā)揮關(guān)鍵作用，對(duì)其含量的檢測(cè)有助于深入探究機(jī)體免疫狀態(tài)以及相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)制。
一、檢測(cè)原理
該試劑盒多采用雙抗體夾心 ELISA 法。在試劑盒內(nèi)，預(yù)先將針對(duì)人可替丁的特異性抗體穩(wěn)固包被于酶標(biāo)板孔底部。當(dāng)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，把標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣本添加至酶標(biāo)板孔中。樣本里的可替丁會(huì)迅速與包被在孔底的抗體特異性結(jié)合，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的溫育，未結(jié)合的雜質(zhì)通過(guò)洗滌步驟被去除。隨后，加入酶標(biāo)記的可替丁抗體，此抗體能夠與已經(jīng)結(jié)合在包被抗體上的可替丁再次結(jié)合，形成穩(wěn)固的 “包被抗體 - 可替丁 - 酶標(biāo)抗體" 免疫復(fù)合物。完成結(jié)合反應(yīng)后，再次進(jìn)行洗滌操作，去除未參與反應(yīng)的多余酶標(biāo)抗體。緊接著，向各孔中添加顯色底物。在酶的催化作用下，原本無(wú)色的底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色產(chǎn)物。反應(yīng)一段時(shí)間后，添加終止液，反應(yīng)停止，溶液顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。通過(guò)酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)（一般為 450nm）下測(cè)量各孔溶液的吸光度（OD 值）。由于溶液顏色的深淺與樣本中可替丁的含量呈正相關(guān)，所以依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的 OD 值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，便能準(zhǔn)確推算出待測(cè)樣本中可替丁的濃度。
二、操作步驟
樣本準(zhǔn)備：血清樣本需在空腹?fàn)顟B(tài)下采集，采集后靜置使其自然凝固，隨后離心獲取上層血清；血漿樣本則依據(jù)不同抗凝劑要求采集，離心處理后備用；組織勻漿要按照規(guī)范方法制備，確保樣本的均一性與穩(wěn)定性。
試劑準(zhǔn)備：將試劑盒從冰箱取出，室溫平衡 30 分鐘。按說(shuō)明書(shū)要求，用蒸餾水將濃縮洗滌液稀釋成工作洗滌液。
加樣：在酶標(biāo)板上準(zhǔn)確設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、空白孔與待測(cè)樣本孔。標(biāo)準(zhǔn)品孔加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，空白孔不加任何試劑，待測(cè)樣本孔加入適量處理好的樣本。
溫育與洗滌：加樣完畢后，封板，37℃溫育相應(yīng)時(shí)間。溫育結(jié)束，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液反復(fù)洗滌酶標(biāo)板，去除未結(jié)合物質(zhì)。
后續(xù)反應(yīng)與檢測(cè)：依次加入酶標(biāo)抗體、顯色底物，按規(guī)定時(shí)間溫育與顯色，最后加入終止液終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定各孔 OD 值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣本中可替丁濃度。
三、注意事項(xiàng)
試劑盒使用前必須充分平衡至室溫，防止溫度差異影響檢測(cè)結(jié)果。
樣本采集與處理過(guò)程務(wù)必嚴(yán)格遵循規(guī)范，避免溶血、脂血等異常樣本干擾檢測(cè)。
洗滌過(guò)程要徹di，確保去除雜質(zhì)，但也要防止過(guò)度洗滌導(dǎo)致已結(jié)合物質(zhì)脫落。
加樣時(shí)要準(zhǔn)確、快速，盡量減少各孔間加樣時(shí)間差異，保證實(shí)驗(yàn)條件的一致性。
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