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上海語純生物科技有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10 ×100ul/100×100ul |
|---|---|---|---|
| 貨號 | CC96307 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產業(yè),制藥/生物制藥 |
產品貨號：CC96307
產品規(guī)格：10 ×100ul/100×100ul
本產品僅供科學研究或進一步生產使用，不可用于臨床診斷或治療。
產品介紹
AGL1感受態(tài)
產品簡介
AGL1 菌株為 C58，RecA 型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因 Rif 和羧芐青霉素抗
性基 因 Carb ，為了便于轉化操作 ，此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型 Ti 質粒 pTiBo542DT
DNA ，此質粒含有 vir 基因 （ vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件，pTiBo542DT-DNA
質粒自身的 T-DNA 轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體 T-DNA 順利轉移）。
pTiBo542DT-DNA 型 Ti 質粒含有篩選標簽：Strep，賦予 AGL1 菌株鏈霉素抗性，適用于水稻、擬
南芥、楊樹等植物的轉基因操作，經 pCAMBIA2301 質粒檢測轉化效率 ≥ 5×103 cfu/μg DNA。
產品組成
組分
AGL1
化學感受態(tài)細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：C58 RecA (Rif R/CarbR) Ti pTiBo542DT-DNA (StrepR) Succinamopine
存儲條件
-80 ℃保存; 請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除琥珀堿型 Ti 質粒 pTiBo542DT-DNA 外，無外源質粒 DNA 殘留；
化學法轉化效率≥5×103 cfu/μg pCAMBIA2301 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中，用手撥da管底混勻，依次于冰上靜置 10 分鐘、液氮 5 分
鐘（或干冰乙醇浴和-80℃冰凍）、37℃水浴 5 分鐘、冰浴 5 分鐘；
3.加入 900 μl 無抗生素的 YEB 液體培養(yǎng)基，于 28℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時；
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的 YEB 平板
上，倒置放于 28 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 天（當平板只含有 50 μg/ml Kan 時，28 ℃培養(yǎng) 48 h 即可；平板中同
時加入 50 μg/ml Kan，20 μg/ml Rif 時，需 28 ℃培養(yǎng) 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 則需要 28 ℃
培養(yǎng) 72-90 h）。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰浴中解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；
3. 利福平濃度不應高于 25 μg/μl，過高的利福平濃度不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率；
4.因為 Ti 質粒丟失的概率極低（可以忽略），所以一般培養(yǎng)農桿菌時不考慮添加相應抗生素。
AGL1感受態(tài)
