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由于每個患者對治療藥物的吸收和代謝不同，正確的給藥對避免毒性反應(yīng)和保持藥物在治療水平至關(guān)重要，這就是患者血清或血漿樣本中的治療藥物監(jiān)測（TDM）發(fā)揮作用的地方。該分析的金標(biāo)準(zhǔn)是LC-MS/MS；然而當(dāng)樣本量比較大時，手動制備樣本是一個很大的挑戰(zhàn)。在這里，我們描述了如何使用Hamilton MassSTAR自動化系統(tǒng)與MassTox®TDM Series A通過LC-MS/MS對100多種藥物進行自動樣品制備和分析。

系統(tǒng)描述

MassSTAR基于Hamilton Microlab® STARlet平臺，配備4個通道：CO-RE®抓手、條形碼閱讀器和一個整合的離心機。臺面上由樣本載架、試劑載架、標(biāo)準(zhǔn)品/對照載架、深孔板(DWP)和移液吸頭載架以及Hamilton加熱振蕩器(HHS)組成。每次運行，系統(tǒng)最多可處理96份樣本，包括對照和標(biāo)準(zhǔn)品。

試劑盒描述

樣品制備基于Chromsystems的MassTox®TDM Series A，這是一種模塊化系統(tǒng)，由三個部分組成：特定參數(shù)集、色譜柱和BASIC Kit A。參數(shù)集包含特定藥物的單個校準(zhǔn)品、對照品和內(nèi)標(biāo)物。色譜柱本身可監(jiān)測近200個參數(shù)，而無需色譜柱切換或改變流動相。結(jié)合所有參數(shù)集中幾乎相同的樣本制備工作流程，這有助于最大限度地減少實驗室的工作量。到目前為止，超過100個參數(shù)的樣品制備可以在MassSTAR上實現(xiàn)自動化，將來會有更多。這些藥物包括抗抑郁藥、抗癲癇藥、抗真菌藥、麥考酚酸和精神安定藥。為了獲得較高的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性，幾乎所有的參數(shù)都由內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)來保障。結(jié)果的可追溯性通過使用基于基質(zhì)的校準(zhǔn)材料來保證。

工作流程

首先，加載所有資源，并追蹤樣本和板的條形碼。均質(zhì)化后，將50µl樣本/校準(zhǔn)品/對照品轉(zhuǎn)移至96深孔板中。加入25µl提取緩沖液，并以600 rpm轉(zhuǎn)速振蕩2分鐘。將250µl制備的內(nèi)標(biāo)溶液移液至各孔中，并以1000 rpm轉(zhuǎn)速振蕩30秒。然后以2000xg離心5分鐘，分離沉淀物。將上清液轉(zhuǎn)移至第二個深孔板中，并用稀釋緩沖液稀釋。稀釋因子取決于參數(shù)設(shè)置和特定質(zhì)譜儀。

技術(shù)

其中一個關(guān)鍵特點是設(shè)備的吸放液全程實時監(jiān)控 (TADM™)技術(shù)。實時監(jiān)控每個移液通道中的每個吸液和分液步驟。TADM™通過可追溯的數(shù)字審計跟蹤驗證樣本轉(zhuǎn)移，并識別錯誤，如樣本中有血凝塊或轉(zhuǎn)移的體積不正確。圖形用戶界面 (GUI) 引導(dǎo)用戶完成加載過程以及庫存檢查（例如，條形碼匹配、檢查微孔板位置是否正確、驗證試劑的適當(dāng)液位）。這意味著在運行開始前，所有試劑和耗材均可獲得足夠的數(shù)量，確保不需要進一步的用戶干預(yù)，從而延長無人值守時間。描述性界面監(jiān)測樣品制備過程的實時狀態(tài)，并顯示系統(tǒng)接下來將執(zhí)行的步驟。GUI還防止無效的用戶輸入，并保護方法文件免受未經(jīng)授權(quán)的操作。此外，為MassTox®TDM Series量身定制的試劑載架能夠?qū)⒎治鲈噭┘虞d到其原始容器中，試劑不必轉(zhuǎn)移，節(jié)省時間，防止污染和試劑混合，并減少液體的蒸發(fā)。

結(jié)果

測定了所有藥物的回收率，回收率取決于分析物，范圍81%-115%。

測定了重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性，以確定總體方法的精度。將至少兩種不同濃度水平的樣品制備10次，并在單個序列中進行測定。變異系數(shù)為0.6到13.7%之間，取決于相應(yīng)的分析物和濃度水平。在不同日期制備并測定至少3個不同濃度水平的樣品（20×5或10×2×2設(shè)計），得到的變異系數(shù)在0.9%至18.9%之間。此外，在三個不同的實驗室中，在五個不同的日期，使用進行五次樣品制備（3x5x5設(shè)計），測定至少三個濃度水平的重現(xiàn)性。所得變異系數(shù)在3.2～25.7%之間。說明書中提供了每個參數(shù)集的綜合數(shù)據(jù)。

對于所有分析物，通過向血清和血漿樣本中加規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)品測定定量下限(LLOQ)和定量上限(ULOQ)。對于所有藥物，LLOQ和ULOQ涵蓋治療藥物監(jiān)測所需的臨床相關(guān)濃度范圍。

方法比較

使用MassTox®TDM Series A采集并分析真實患者樣本。所有樣本均已手動處理并在MassSTAR上進行比較。

結(jié)果表明，MassSTAR樣本制備與手動處理之間具有良好的相干性和可比性。