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瀏覽次數(shù)什么是賽默飛 7500 熒光定量 PCR 儀？
賽默飛 7500 熒光定量 PCR 儀（Thermo Fisher Scientific 7500 Real-Time PCR System）是一款經(jīng)典的實時熒光定量 PCR 儀器，廣泛應用于基因表達分析、病原體檢測、突變篩查、基因分型和藥物研發(fā)等領域。7500 系列 PCR 儀通過實時監(jiān)測擴增過程中的熒光信號，精確定量目標核酸的濃度，是分子生物學研究和臨床診斷的核心工具之一。
1. 產(chǎn)品簡介
賽默飛 7500 熒光定量 PCR 儀以其高靈敏度、高特異性和強大的數(shù)據(jù)分析能力而受到科研人員的青睞。它支持多種實驗類型，包括相對定量、絕對定量、突變分析和熔解曲線檢測，能夠滿足從基礎科研到臨床診斷的多種需求。
主要特點：
實時檢測：實時監(jiān)控熒光信號，精確定量目標核酸。
多通道檢測：支持多色熒光通道，用于多重實驗設計。
快速模式：部分型號支持快速運行模式，將實驗時間縮短至30分鐘。
靈活性強：支持多種熒光染料和探針技術，包括 TaqMan 探針和 SYBR Green。
數(shù)據(jù)處理能力強：內(nèi)置軟件提供全面的 Ct 值分析、標準曲線繪制和結果輸出功能。
2. 技術規(guī)格
(1) 光學系統(tǒng)
支持多色熒光檢測，標準配置包括 5 個熒光通道：
FAM、SYBR Green、VIC、HEX、ROX 等染料。
靈敏度高，能夠精確檢測低豐度核酸。
(2) 溫控模塊
溫度范圍：4℃ 至 100℃，適應各種實驗需求。
溫度均勻性：±0.5℃，確保所有樣品反應一致。
(3) 運行模式
標準模式：適合所有常規(guī)實驗。
快速模式：優(yōu)化熱循環(huán)流程，將實驗時間縮短至 30 分鐘。
(4) 反應板支持
96 孔光學反應板，適合中等通量實驗室。
(5) 數(shù)據(jù)采集與分析
實時采集熒光信號，生成擴增曲線、熔解曲線和標準曲線。
數(shù)據(jù)精確可靠，支持相對定量、絕對定量和基因分型分析。
3. 核心技術與功能
(1) 實時熒光檢測
在 PCR 擴增的每個循環(huán)中實時檢測熒光信號，監(jiān)控目標核酸的累積量。
熒光信號與目標核酸的初始濃度呈正比，支持精確定量分析。
(2) 熒光檢測方法
SYBR Green 染料法：
熒光染料嵌入雙鏈 DNA，發(fā)出熒光信號。
優(yōu)點：實驗簡單，成本低。
缺點：可能受到非特異性擴增干擾。
TaqMan 探針法：
探針通過熒光基團和猝滅基團的分離發(fā)出熒光信號。
優(yōu)點：特異性高，結果更可靠。
缺點：探針設計和合成成本較高。
(3) 高分辨率熔解曲線分析
熔解曲線分析用于驗證擴增特異性，單一峰值表明擴增產(chǎn)物特異性好。
(4) 快速模式
通過優(yōu)化熱循環(huán)程序，7500 系列的快速模式可在 30 分鐘內(nèi)完成實驗，極大提高了實驗室的工作效率。
(5) 智能化數(shù)據(jù)分析
軟件自動生成 Ct 值和標準曲線，并可導出擴增曲線和熔解曲線等實驗數(shù)據(jù)。
4. 工作流程
(1) 樣品準備
核酸提取：從樣品中提取 DNA 或 RNA，確保純度和濃度符合實驗要求。
逆轉錄（針對 RNA 樣本）：將 RNA 轉錄為 cDNA。
(2) 配置 PCR 反應體系
配制 PCR 反應液，包括：核酸模板、引物、熒光染料或探針、dNTP、緩沖液和 Taq DNA 聚合酶。
按規(guī)定體積分裝到 96 孔反應板中，并密封。
(3) 設置實驗參數(shù)
在軟件中選擇實驗類型（如相對定量、絕對定量或基因分型）。
設置熒光通道和樣品信息（樣品名稱、分組等）。
輸入熱循環(huán)程序，包括變性、退火和延伸階段的溫度和時間。
(4) 運行實驗
將反應板放入儀器樣品艙，啟動實驗。
實驗運行時，實時采集熒光信號，生成擴增曲線。
(5) 數(shù)據(jù)分析
實驗完成后，使用軟件分析 Ct 值、標準曲線、熔解曲線等數(shù)據(jù)。
輸出實驗報告或?qū)С鰯?shù)據(jù)文件。
5. 應用領域
(1) 基因表達分析
通過實時檢測基因的表達水平，用于研究基因調(diào)控機制和疾病標志物。
(2) 病原體檢測
快速檢測病毒和細菌 DNA 或 RNA，用于傳染病診斷（如檢測）。
(3) 突變篩查
檢測基因突變和多態(tài)性（SNP），廣泛應用于遺傳性疾病研究和癌癥診斷。
(4) 藥物研發(fā)
測量特定基因在藥物處理下的表達變化，用于篩選藥物靶點。
(5) 食品與環(huán)境安全
檢測食品中的病原體或轉基因成分，監(jiān)測環(huán)境樣本中的污染物。
6. 優(yōu)勢與特點
高靈敏度與高特異性
光學系統(tǒng)靈敏度高，能夠檢測低豐度核酸模板。
TaqMan 探針法確保實驗結果的特異性。
快速運行
快速模式縮短實驗時間，提高實驗室效率。
易用性
用戶界面友好，支持一鍵設置和自動化數(shù)據(jù)分析。
靈活性
兼容多種熒光染料、探針和實驗類型，適合多樣化實驗需求。
可靠性
數(shù)據(jù)穩(wěn)定性高，結果重復性好，適合科研和臨床應用。
7. 注意事項
樣品準備：確保核酸提取的純度和濃度符合實驗要求，避免抑制劑干擾 PCR 反應。
試劑質(zhì)量：使用新鮮的 PCR 試劑，避免試劑降解導致實驗失敗。
反應板密封：確保光學反應板密封良好，防止蒸發(fā)或氣泡干擾熒光檢測。
定期維護：清潔光學窗口，校準溫控模塊，確保儀器性能穩(wěn)定。
8. 總結
賽默飛 7500 熒光定量 PCR 儀以其強大的檢測能力和高效的數(shù)據(jù)分析功能，為分子生物學研究和臨床應用提供了可靠的解決方案。無論是基因表達分析、病原體檢測還是藥物研發(fā)，7500 系列都能滿足實驗室的多種需求。其快速模式、靈活性和高靈敏度，使其成為科研和診斷領域中廣泛應用的經(jīng)典 PCR 儀器之一。
