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天津睿創(chuàng)生物科技有限公司
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睿創(chuàng)生物的常用方法及原理免費代測

時間:2023/4/11閱讀:830
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主營產(chǎn)品:

天津睿創(chuàng)生物Elisa試劑盒系列

ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法,例如:ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑、酶聯(lián)免疫分析試劑盒酶免試劑盒等,比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。

ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來,得到科研工作者的認可及推崇,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展。

Elisa生物試驗是一種敏感性高,特異性強,重復(fù)性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中。

可檢測種屬

(人,小鼠,大鼠,植物,魚,蝦,蟹,牛,羊,狗,貓,微生物,細胞,土壤等動植物)

可以檢測樣為

(血清,血漿,唾液,尿液,組織,細胞上清,裂解液等)

產(chǎn)品檢測目的:

樣本水平表達(定量檢測,定性檢測,酶活性檢測)

規(guī)格:96T 可以檢測89個樣  48T可以檢測41個樣

備注:6個標(biāo)準(zhǔn)一個空白對照

有效期:6個月 保存2-8°C

elisa試劑盒的優(yōu)點:

一、高效、靈敏、特異的抗體;

二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;

三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;

四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型;

五、最大限度的節(jié)省實驗經(jīng)費。

常用方法及原理如下:

1. 夾心法:

夾心法常用于檢測大分子抗原,一般的操作步驟為:

a. 將具有專一性的抗體固著(coating)于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體

b. 加入待測檢體,檢體中若含有待測的抗原,則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié)

c. 洗去多余待測檢體,加入另一種對抗原專一的一次抗體,與待測抗原進行鍵結(jié)

d. 洗去多余未鍵結(jié)一次抗體,加入帶有酶的二次抗體,與一次抗體鍵結(jié)

e. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

原理:針對抗原分子上2個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體,將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物。

2. 間接法

間接法常用于檢測抗體,一般的操作步驟為:

a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待測檢體,檢體中若含有待測的一次抗體,則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結(jié)。

c. 洗去多余待測檢體,加入帶有酶的二次抗體,與待測的一次抗體鍵結(jié)。

d. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酶底物使酶呈色,藉儀器(ELISA reader)測定塑膠盤中的吸光值(OD值),以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗體的含量。

原理:利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體。

3. 競爭法

競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制,一般用于檢測小分子抗原,天津睿創(chuàng)生物其操作步驟為:

a. 將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體

b. 加入待測檢體,使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié)

c. 加入帶有酶的抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié),由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限,因此當(dāng)檢體中抗原的量越多,則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié),即所謂競爭法之由來。

d. 洗去檢體與帶有酶的抗原,加入酶底物使酶呈色,當(dāng)檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少,顯色也就越淺。

e. 當(dāng)需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時,一般會考慮使用競爭法ELISA。

原理:將特異性抗體包被于固相載體表面,經(jīng)洗滌后分成兩組:一組加酶標(biāo)記抗原和被測抗原的混合液,另一組只加酶標(biāo)記抗原,經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為所要測定的未知抗原的量。

天津睿創(chuàng)生物免費代測服務(wù)

天津睿創(chuàng)生物"始終以"提供好的質(zhì)量給客戶,為客戶的利益服務(wù)"為理念。拓展頂尖的產(chǎn)品研發(fā)與經(jīng)驗豐富的技術(shù)團隊,致力于創(chuàng)新產(chǎn)品的研發(fā)。目前,實驗室占地約800平米,內(nèi)設(shè)先進實驗儀器設(shè)備,能夠完成ELISA檢測、PCR擴增、免疫學(xué)檢測等各類生物學(xué)實驗。天津睿創(chuàng)生物經(jīng)過10年ELISA試劑盒技術(shù)的積累與沉淀,不斷創(chuàng)新突破,努力將中國生命科學(xué)研究提升到全新的高度!

凡購買本公司目錄任何一種酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,您只需將需要檢測的動物(Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey, Pig……)種類和檢測指標(biāo)(白介素類、激素類)及標(biāo)本數(shù)量(48T/96T)通知公司業(yè)務(wù)員即可。

免費代測服務(wù)樣本要求:
在收集標(biāo)本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測,對收集后當(dāng)天就進行檢測的標(biāo)本,及時儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本,請造模取材后,將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實驗質(zhì)量,所以避免反復(fù)凍融。代測放免標(biāo)本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說明書,具體操作注意事項請與我司技術(shù)人員溝通。

免費代測服務(wù)液體類標(biāo)本:標(biāo)本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。

血 清: 室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

血 漿: 應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

尿液、胸腹水、腦脊液:用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

細胞培養(yǎng)上清: 檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.0-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

組織標(biāo)本: 切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清置于-20度或-70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

天津睿創(chuàng)生物標(biāo)本時需注明以下情況:
1、標(biāo)本編號
2、所測項目
3、是否做復(fù)孔
4、實驗后標(biāo)本是否寄回




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