又是一年科研高峰期，很多老師和同學(xué)們用上了碧芯生物的Beadstar-mPlex®多細(xì)胞聯(lián)檢試劑盒，也咨詢了很多問題，在這里，我們把問題總結(jié)一下，統(tǒng)一回復(fù)大家

一檢測項(xiàng)目部分常見問題

1 Beadstar-mPlex®多細(xì)胞聯(lián)檢試劑盒可以檢測哪些細(xì)胞因子？

2 如果只檢測幾種，能否用Beadstar-mPlex®多細(xì)胞聯(lián)檢試劑盒？

可以，我們這個聯(lián)檢試劑是可以靈活組合的，可以根據(jù)檢測目的，自由選擇幾種細(xì)胞因子聯(lián)合檢測（前提是在我們所提供的細(xì)胞因子范圍內(nèi)進(jìn)行選擇，見題1）。試劑盒也是根據(jù)需要檢測的細(xì)胞因子數(shù)量來定價的。

二 樣本制備部分常見問題

1 檢測需要提供樣本是什么，需要多少檢測樣本量？

樣本：細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清

所需樣本量：血清（25-50 μL）；細(xì)胞上清（25-50 μL）

2 要使用Beadstar-mPlex®多細(xì)胞聯(lián)檢試劑盒對流式細(xì)胞儀有什么要求？

流式細(xì)胞儀需要有PE，APC ,APC-CY7 3個熒光通道。

3 是不是每次實(shí)驗(yàn)都要使用一瓶新的標(biāo)準(zhǔn)品？

標(biāo)準(zhǔn)品在配成溶液后不穩(wěn)定， 在配制成溶液的12小時后將不能再使用，在每次實(shí)驗(yàn)前都要重新配置新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。Beadstar-mPlex®多細(xì)胞聯(lián)檢試劑盒（50T）會配置1管標(biāo)準(zhǔn)品，Beadstar-mPlex®多細(xì)胞聯(lián)檢試劑盒（100T）會配置2管標(biāo)準(zhǔn)品。此外，也有單獨(dú)的標(biāo)準(zhǔn)品可以購買。

4 需不需要振動混合捕獲微球？

在使用之前 捕獲微球必須充分的振動混合， 從微球混合液試管中分到，每一個實(shí)驗(yàn)管之前， 直至在送到儀器進(jìn)行上樣檢測之前 反應(yīng)管都必須充分振動混合， 這是由于充分的振動能夠防止微球聚集成團(tuán)， 若混合不足會導(dǎo)致在進(jìn)行樣品分析時候出現(xiàn)檢測到很少或者沒有檢測到微球的情況 ，因此在使用流式細(xì)胞儀分析標(biāo)準(zhǔn)品或者樣品之前， 必須充分振蕩混合微球， 試驗(yàn)管在放置到流式細(xì)胞儀上檢測前需要振蕩混合3-5秒鐘， 這樣在FL3通道里面能夠更好的分辨出帶有不同標(biāo)志的微球。

三 上機(jī)檢測部分常見問題

為什么實(shí)驗(yàn)結(jié)果樣品都顯示高度的陽性？

可能是因?yàn)闃悠返臐舛忍?請對您的樣品, 進(jìn)行不同稀釋度的檢測， 如果所有樣品都顯示陽性或者高于標(biāo)準(zhǔn)品的最高濃度讀數(shù)， 這時候請對您的樣品進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋 因?yàn)槟臉悠返臐舛纫迅哂诒鞠到y(tǒng)的正常檢測范圍。

四 結(jié)果分析常見問題

1 Beadstar-mPlex®多細(xì)胞聯(lián)檢試劑盒檢測結(jié)果是否可直接與ELISA的分析結(jié)果進(jìn)行對比?

不可以，Beadstar-mPlex®多細(xì)胞聯(lián)檢試劑盒是基于流式熒光法的，雖然流式熒光法檢測體系相對于ELISA分析具有良好的優(yōu)勢 能夠提供更高的敏感性和更大的濃度檢測范圍， 但是兩者得出的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不能夠直接比較。需對Beadstar-mPlex®多細(xì)胞聯(lián)檢試劑檢測到的數(shù)據(jù)通過和已有的ELISA數(shù)據(jù)進(jìn)行校正，得到兩者的相關(guān)性結(jié)果。

2 標(biāo)準(zhǔn)品和/或樣本的平均熒光強(qiáng)度過低的原因是什么？

1) 反應(yīng)溫度低 2) 反應(yīng)時間短 3) 樣本過度稀釋4) 孵育過程中未避光

3 聯(lián)檢細(xì)胞因子的檢測線性范圍一致嗎

不一致，每一種細(xì)胞因子都有對應(yīng)的檢測范圍（見說明書，試劑盒說明書上有詳細(xì)說明）。我們不建議研究者根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線外推低于標(biāo)準(zhǔn)曲線值的實(shí)驗(yàn)報告數(shù)值。