出現(xiàn)嚴重的RNA污染
如圖所示，質(zhì)粒提取之后進行瓊脂糖凝膠電泳，出現(xiàn)明顯的RNA條帶，說明有RNA污染。
原因及解決方法：
（1）未在緩沖液 RS*中事先加入RNase A。解決方法：補加RNase A。
（2）加入RNase A的緩沖液 RS*長期保存于室溫，導(dǎo)致RNase A活性下降。解決方法：每次使用后置于 4℃保存。若長期不用，置于-20℃保存。
（3）細菌過量,RNase A不能有效降解RNA。解決方法：將細菌用量減半或增加RNase A在緩沖液 RS*中的濃度。
出現(xiàn)基因組污染
（1）菌體裂解和中和過程中,劇烈混合造成基因組DNA斷裂所致。解決方法：溫和地進行菌體的裂解和中和。
（2）加裂解液 LB時操作時間過長，造成基因組DNA斷裂所致。解決方法：將裂解步驟控制在5分鐘內(nèi)完成。
（3）細菌的質(zhì)量差（反復(fù)凍融的細菌，陳舊的細菌，培養(yǎng)條件不合適的細菌等）中有許多斷裂或降解而游離的基因組DNA，使用生長良好的新鮮細菌。
超螺旋質(zhì)粒比例低
如圖右所示，質(zhì)粒提取之后進行瓊脂糖凝膠電泳，開環(huán)質(zhì)粒的占比約20%，說明超螺旋比例低，一般超螺旋比例需要＞90%，一般來說超螺旋比例越高，質(zhì)粒的穩(wěn)定性越高，高超螺旋比例的質(zhì)粒在轉(zhuǎn)染效率、基因表達水平等方面具有更好的表現(xiàn)。
原因：裂解時間不宜過長，加入裂解液后裂解時間不應(yīng)超過5分鐘，以免質(zhì)粒受到破壞
解決方法：優(yōu)化裂解時間；確保質(zhì)粒的結(jié)合和所有溶液都在室溫下進行，減少離心力對質(zhì)粒超螺旋結(jié)構(gòu)的影響，因為過度的離心可能會破壞質(zhì)粒的超螺旋結(jié)構(gòu)。
內(nèi)毒素殘留高
常規(guī)質(zhì)粒DNA純化中，質(zhì)粒DNA仍需要從55%蛋白質(zhì)、20%RNA、3%內(nèi)毒素和3%基因組DNA中分離，在質(zhì)粒DNA制備的菌體裂解過程中，內(nèi)毒素分子被釋放到溶菌液中。由于內(nèi)毒素常形成囊狀結(jié)構(gòu)，其分子量、電荷性和疏水性都與質(zhì)粒DNA相似，常用的純化方法很難將內(nèi)毒素與質(zhì)粒DNA分開。內(nèi)毒素會降低原代細胞和敏感培養(yǎng)細胞的轉(zhuǎn)染效率，干擾免疫細胞的體外轉(zhuǎn)染。由于實驗?zāi)康牟煌?，對質(zhì)粒DNA的內(nèi)毒素要求亦不同，尤其是在細胞轉(zhuǎn)染、基因沉默研究、基因治療等過程中，對質(zhì)粒質(zhì)量、內(nèi)毒素水平要求更為苛刻，對于非敏感型的的轉(zhuǎn)染實驗，要求內(nèi)毒素殘留0.1～2.5 EU/ug，對于敏感型的的轉(zhuǎn)染實驗，要求內(nèi)毒素殘留＜0.1 EU/ug。
原因：內(nèi)毒素去除時操作不當或者未選擇合適的試劑
解決方法：
（1）如果采用的內(nèi)毒素清除的方法，離心之后，上層水相含DNA，下層藍色油狀相含內(nèi)毒素和其它雜質(zhì)。這時注意不要吸到藍色油狀層，里面含內(nèi)毒素等雜質(zhì)。
（2）在使用樹脂純化系統(tǒng)去除內(nèi)毒素時，需要先活化樹脂，然后使用平衡緩沖液平衡樹脂，以確保最佳的去除效率。
天津益元利康生物科技有限公司可以為您提供多家的質(zhì)粒提取試劑盒，包括但不限于凱杰QIAGEN質(zhì)粒中提試劑盒、簡石去內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA小量提取試劑盒TD429、Biomiga質(zhì)粒提取試劑盒，歡迎咨詢?。?/span>
一、輻射五大服務(wù)方向：
1.國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理；
2.國外試劑訂購（直訂，或境外代理）；
3.基因組測序（二代，二代+三代）；
4.基因分型（SNP檢測）：低/中/中 高通量項目；
5.生物樣本運輸（國內(nèi)、）；
二、多家代理品牌，涉及30多種較有名品牌，經(jīng)營代理500多個品牌：
Qiagen、Sigma、R&D、Epigentek、ThermoFisher、DNA Genotek、USA Scientific、Matreya、Sage Science、List Labs、Macrocyclics、Steraloids、NIBSC、mobio、immunodx、cellsystems、medicago、abcam、CST、Roche、Bethyl、sino Biological、clodrosome、adi BIO-WORLD、TOKU-E、HYPHEN BioMed、moltox、ZeptoMetrix、International Humic、biocytex、Toxin Technology 、Streck、Elastin、biomax、Orflo Technologies、Accegen、Advbiomart、genlantis、R&D、Cygnus Technologies LLC、Enzyme Research、Bio/Data Corporation、Greer Lab 、Solarbio、bangslabs、bioline、musechem、Novocastra stemrd、hyphen-biomed、polyplus、moltox 、exiqon、pentapharm、verichemlabs、GenStar、ALZET、lucernatechnologies 、meridian、origene、zimmerpeacocktech、horizondiscovery、Reagents、megazyme、elisasystems………
所有生物試劑耗材都可以進口，特別是冷門品牌，均能給客戶購買到。價格優(yōu)，貨期短，可加急，快10天到貨；保證服務(wù)質(zhì)量，所有產(chǎn)品均提供售后服務(wù)。大部分客戶我們提供貨到付款服務(wù)，
公司自成立依靠過硬的服務(wù)和良好的信譽與各大企事業(yè)單位、科研單位建立長期合作?？蛻舭ū贝螅迦A，地大，中科院各所，各大藥企等等。
專業(yè)訂購國內(nèi)外試劑耗材，常備現(xiàn)貨，一手貨源，歡迎合作。
4
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務(wù)