該polyplus轉染試劑 jetPRIME®產(chǎn)品說明書以DNA轉染為例來進行說明：
第0天：細胞接種
→根據(jù)下表在V mL細胞生長培養(yǎng)基中接種細胞（每個孔、盤子或燒瓶的數(shù)量）
培養(yǎng)皿 | 細胞數(shù)量 | V=轉染過程中培養(yǎng)基的體積 |
96孔板 | 7500 - 10 000 | 0.1 mL |
24孔板 | 50 000 - 80 000 | 0.5 mL |
12孔板 | 80 000 - 150 000 | 1 mL |
6孔板/35mm | 150 000 - 250 000 | 2 mL |
100 mm/燒瓶 75 cm2 | 1 x 106 - 2 x 106 | 10 mL |
*備注：對于特定的細胞類型或懸浮細胞，請參考完整的方案。
第1天：轉染
→在血清存在的情況下進行轉染
→僅使用jetPRIME®緩沖液
→以60-80%融合率轉染細胞
培養(yǎng)皿 | W=jetPRIME®緩沖液的體積 | X=添加的DNA量 | Y=jetPRIME®試劑的體積 |
96孔板 | 10 µL | 0.1 µg | 0.2 µL |
24孔板 | 50 µL | 0.5 µg | 1 µL |
12孔板 | 75 µL | 0.8 µg | 1.6 µL |
6孔板/35mm | 200 µL | 2 µg | 4 µL |
100 mm/燒瓶 75 cm2 | 500 µL | 10 µg | 20 µL |
第2-3天：測量基因表達
√ Protocol優(yōu)化：
測試不同的DNA量：X、0.5X和1.5X；
測試不同的DNA/jetPRIME®比例，1:2至1:3；
有關細胞特異性Protocol，請聯(lián)系益元利康客服獲取相關信息。
培養(yǎng)皿 | W=jetPRIME®緩沖液的體積 | X=添加的DNA量 | Y=jetPRIME®試劑的體積 |
96孔板 | 10 µL | 0.05-0.20 µg | 0.10-0.60 µL |
24孔板 | 50 µL | 0.25-0.75 µg | 0.50-2.25 µL |
12孔板 | 75 µL | 0.4-1.2 µg | 0.8-3.6 µL |
6孔板/35mm | 200 µL | 1-3 µg | 2-9 µL |
100 mm/燒瓶 75 cm2 | 500 µL | 5-15 µg | 10-45 µL |
備注：對于HEK-293和HeLa細胞，可以將DNA量減少到0.5X，并使用1:2 DNA/jetPRIME®比例。
√ 提高敏感細胞細胞活力的提示：
轉染后4小時更換培養(yǎng)基；
將DNA量減少到0.5倍，同時保持之前使用的DNA/jetPRIME®比例；
在較早的時間點（例如轉染后24小時而不是48小時）分析轉染；
檢查靶基因是否影響細胞活力。
√ 良好的DNA轉染實例：
適當儲存jetPRIME®（5±3°C）；
確保細胞在轉染前已傳代兩次以上且少于20次；
丟棄過度分化的細胞；
定期檢查支原體污染情況；
使用報告基因來建立和優(yōu)化轉染條件；
血清質量可能嚴重影響轉染效率，購買新一批血清時或胰蛋白酶檢查細胞活力以及轉染效率。
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