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提取FFPE組織中的核酸時的難點

閱讀:1184      發(fā)布時間:2023-2-7
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使用福爾馬林固定過組織,其組織中的蛋白質與核酸(DNARNA)會失去生物活性。福爾馬林石蠟作為固定劑和包埋劑,將細胞保護在其中,十分影響核酸的提取,并且長時間的保存可能會使樣品中的核酸發(fā)生降解

傳統(tǒng)的方法會使用二甲苯來溶解石蠟,這種有機溶劑高度易燃,在實驗過程中需要先多次使用二甲苯來溶解石蠟,之后需要多次使用乙醇來沖洗殘留的二甲苯。在使用二甲苯溶解石蠟的過程中,大量的二甲苯可能會對核酸造成損傷,進一步加劇核酸的降解;在溶解與沖洗過程中,即使再仔細也難免將寶貴的組織材料沖掉;并且沖洗過程很難將二甲苯WAN全洗凈,殘留的二甲苯也會影響核酸的提取效果。

此外,組織的消化程度也會影響DNA的提取效率,組織不WAN全消化極大的影響DNA的提取效率。

 

總的來說,從FFPE組織中提取DNA受到以下幾個因素的制約:組織材料有限且長時間保存導致DNA受損,產(chǎn)量降低;使用福爾馬林浸泡組織,導致不可逆的DNA交聯(lián),這部分DNA已無法進行擴增。

Qiagen QIAamp DNA FFPE Tissue Kit(貨號56404)技術原理

Qiagen QIAamp DNA FFPE Tissue Kit(貨號56404)可以成功克服影響FFPRE DNA提取質量的因素,從而得到高質量DNA

QIAamp DNA FFPE Tissue Kit使用成熟的QIAamp MinElute技術,從小體積樣本中純化基因組DNA和線粒體DNA。該試劑盒同時具備硅膠膜選擇性結合DNA的特性,以及20 µl100 µl的靈活洗脫體積。

經(jīng)專門優(yōu)化的裂解條件,無需過夜溫育即可從福爾馬林固定、石蠟包埋組織中高效純化基因組DNA。蛋白酶K消化后在較高的溫度溫育,部分去除游離DNA的福爾馬林交聯(lián),提高DNA產(chǎn)量和純度,更適用于下游應用。需要注意的是,從福爾馬林固定、石蠟包埋樣本中分離的DNA分子量通常低于新鮮或冷凍樣本中的DNA。DNA片段化的程度取決于樣本類型、儲存時間以及固定的條件。

使用Qiagen QIAamp DNA FFPE Tissue Kit(貨號56404)提取的高質量DNA可以直接應用于多個下游反應。如單核苷酸多態(tài)性(SNP)、短串聯(lián)重復序列(STR)基因分型和藥物基因組學研究,也可用于PCR。

Qiagen QIAamp DNA FFPE Tissue Kit(貨號56404)的優(yōu)點:

1. 流程簡單

2.最快僅30分鐘即可得到高純DNA

3.特別適用于同時處理多個樣本。

4. 從小體積樣本中純化基因組DNA和線粒體DNA


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