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實(shí)時熒光定量pcr儀價格
由熒光定量系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)組成，用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光
原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析。實(shí)時設(shè)備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行正常化處理來彌補(bǔ)背景熒光的差異
產(chǎn)品簡介
詳細(xì)介紹
實(shí)時熒光定量pcr儀價格
樣品到達(dá)域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱為（的循環(huán)數(shù)）。域值應(yīng)設(shè)定在使的擴(kuò)增效率為大，這樣可以獲得準(zhǔn)確，可重復(fù)性的數(shù)據(jù)。如果同時擴(kuò)增的還有標(biāo)有相應(yīng)濃度的，分析將產(chǎn)生一條，可以用來計(jì)算未知樣品的濃度。
所謂real-time Q-PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，后通過對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在 real-time 技術(shù)的發(fā)展過程中，兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用：（1）在90年代早期，Taq的5′活性的發(fā)現(xiàn)，它能降解特異性熒光記探針，因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。（2）此后熒光探針的運(yùn)用使在一密閉的反應(yīng)管中能實(shí)時地監(jiān)測反應(yīng)全過程。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運(yùn)用。
實(shí)時熒光定量pcr儀價格
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA是呈指數(shù)方式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板，從而進(jìn)入。在傳統(tǒng)的PCR 中，常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應(yīng)的終擴(kuò)增產(chǎn)物，因此用此對PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處。在real-time Q-PCR中，對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴(kuò)增相關(guān)的熒光信號，隨著反應(yīng)時間的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲 線。在PCR反應(yīng)早期，產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別，而后熒光的產(chǎn)生進(jìn)入指數(shù)期、線性期和終的平臺期，因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點(diǎn) 上來檢測PCR產(chǎn)物的量，并且由此來推斷模板初的含量。為了便于對所檢測樣本進(jìn)行比較，在real-time Q-PCR反應(yīng)的指數(shù)期，首先需設(shè)定一定熒光信號的域值，一般這個域值（threshold）是以PCR反應(yīng)的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號 （），熒光域值的缺省設(shè)置是3～15個循環(huán)的熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。如果檢測到熒光信號超過域值被認(rèn)為是真正的信號，它可用于定義 樣本的域值循環(huán)數(shù)（Ct）。的含義是：每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達(dá)到設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。研究表明，每個模板的Ct值與該模板的起始的 存在，起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的可作出，因此只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣 品的起始拷貝數(shù)。