SmIg 是B 細(xì)胞的抗原識(shí)別受體，也是B 細(xì)胞特異的表面標(biāo)志，用直接免疫熒光法可檢查出SmIg。用熒光素標(biāo)記的抗Ig 抗體，在一定條件下與淋巴細(xì)胞混合，熒光素標(biāo)記的抗Ig 抗體可以與B 細(xì)胞表面的Ig 結(jié)合，在熒光顯微鏡下觀察可見(jiàn)B 細(xì)胞膜上出現(xiàn)熒光。此方法可用來(lái)鑒定B 淋巴細(xì)胞。

材料與儀器

ICR 小鼠
異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的兔抗小鼠Ig 抗體 Hank's液
臺(tái)式離心機(jī) 離心管吸管移液管

步驟

1. 采用頸椎脫臼法處死小鼠，解剖取出脾臟放入盛有6 ml Hank's液的平皿中，用100 目鋼網(wǎng)研磨，混勻。從中吸取1 ml細(xì)胞懸液放入一試管中，加滿Hank's液，離心1000 rpm，10 分鐘，洗滌細(xì)胞一遍。傾去上清，沉積的細(xì)胞恢復(fù)1 ml容積，即為約1x107/ml的細(xì)胞懸液。另取一支試管，吸取1x107/ml的細(xì)胞懸液0.4 ml加Hank's液3.6 ml，即為1x106/ml的細(xì)胞懸液。

2. 取2 ml離心管兩只，各加入1x106 /ml的細(xì)胞懸液1 ml，用臺(tái)式離心機(jī)離心2000 rpm，3 分鐘，棄去上清液。一支加入熒光素標(biāo)記的兔抗鼠Ig抗體100 ul，另一支不加抗體作對(duì)照，置4 ℃冰箱30 分鐘。

3. 取出離心管，用Hank's 液洗滌細(xì)胞兩次，以去除游離的抗體，最后一次離心后棄去上清液，留少許回流液，混勻，滴片，用熒光顯微鏡觀察。

注意事項(xiàng)

一、在滴片前要去除游離的抗體，以避免假陽(yáng)性結(jié)果。

常見(jiàn)問(wèn)題

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

熒光顯微鏡觀察，落射激發(fā)光下SmIg 陽(yáng)性細(xì)胞可見(jiàn)環(huán)狀或斑點(diǎn)狀熒光。用鎢絲燈光源透射光照明計(jì)數(shù)同一視野內(nèi)淋巴細(xì)胞總數(shù)，共計(jì)數(shù)200～300 個(gè)淋巴細(xì)胞，算出其中SmIg 陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。

深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、壹流的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O(shè)在廣東，服務(wù)面向全國(guó)。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開(kāi)發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號(hào)傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。

精品国产亚洲国产亚洲,久热中文在线观看精品视频,成人三级av黄色按摩,亚洲AV无码乱码国产麻豆

B 淋巴細(xì)胞膜表面免疫球蛋白的檢查

會(huì)員登錄

收藏該商鋪

提示