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端粒顯示實驗

時間:2022/12/1閱讀:1160
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簡介

端粒(telomere)是真核細胞染色體末端的 DNA 重復(fù)序列,它與多種端粒結(jié)合蛋白結(jié)合在一起,發(fā)揮重要的生物學(xué)功能,在細胞分裂的過程中,盡管端粒也會不斷的縮短,但可以通過端粒酶的催化,以自身 RNA 為模板進行補充,從而代償了這一損失。


端粒的功能保護染色體末端完整性,穩(wěn)定染色體,保障染色體 DNA 在復(fù)制的過程中不被縮短,保護染色體結(jié)構(gòu)基因,防止基因組 DNA 降解、防止染色體末端融合,調(diào)節(jié)細胞生長、衰老等作用。


目前,用于端粒顯示實驗的方法主要有 3 種:Southern印跡法、Q-FISH法和qPCR法。


原理

Southern印跡法檢測端粒長度的基本原理是盡管不同物種的端粒的重復(fù)序列可存在差異,在同一種生物體內(nèi)為特定序列,如人端粒是由 6 個堿基重復(fù)序列(TTAGGG)和結(jié)合蛋白組成。通過與放射性同位素 32P 標記的探針 32P-(TTAGGG)n,檢測末端限制性片段(terminal restriction fragments,TRF)的長度分布情況,并計算出端粒長度的平均值。
 
Q-FISH法檢測端粒形態(tài)及長度的基本原理是盡管不同物種的端粒的重復(fù)序列可存在差異,但在同一種生物體內(nèi)為特定序列,如人端粒是由 6 個堿基重復(fù)序列(TTAGGG)和結(jié)合蛋白組成。因此,對于端粒長度的檢測,傳統(tǒng)上可以對上述重復(fù)序列設(shè)計探針,采用核酸分子雜交技術(shù)進行測量。
 

QPCR法檢測端粒長度的基本原理是盡管不同物種的端粒的重復(fù)序列可存在差異,但在同一種生物體內(nèi)為特定序列,如人端粒是由 6 個堿基重復(fù)序列(TTAGGG)和結(jié)合蛋白組成。因此,對于端粒長度的檢測,傳統(tǒng)上可以對上述重復(fù)序列設(shè)計探針,采用核酸分子雜交技術(shù)進行測量。基于一個細胞中端粒長度的均值與端粒-單拷貝基因比率(Telomere-to-Single Copy Gene ratio,T/S 比率)有關(guān)的證據(jù),通過測量和計算出 T/S 比率,從而測量出端粒的長度。



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