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當(dāng)前位置：深圳市安培生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>高效率轉(zhuǎn)染N2a小鼠神經(jīng)瘤母細(xì)胞的操作方法
轉(zhuǎn)染條件：
培養(yǎng)板：6孔板
轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA大?。?6000bp
轉(zhuǎn)染試劑用量：10ul
核酸用量：電訊
轉(zhuǎn)染時(shí)間：48小時(shí)
轉(zhuǎn)染試劑：Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑（AD600150)
培養(yǎng)基：Z7181-500 胎牛血清
細(xì)胞凍存：CE70100T無(wú)血清細(xì)胞凍存液
操作步驟:
提前 1 天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在 60-80%左右，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘。
在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻；細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。
細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程中不用換液。
分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，48-96 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。若進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時(shí)熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。
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