1. 概要

    赭曲霉毒素Ａ由 Aspergillus 和 Penicillium 兩類霉菌產(chǎn)生，除明顯的腎毒性外，赭曲霉毒素A還表現(xiàn)出肝毒性、致畸性、致癌性和免疫抑制性等特性。對(duì)人體健康而言，危害不僅來(lái)源于污染的植物性食品，也通過(guò)動(dòng)物性食品的攝入。我國(guó)規(guī)定谷物、豆類及其制品中赭曲霉毒素A不得超過(guò)5μg/kg，歐盟規(guī)定谷物、豆類及其制品中赭曲霉毒素A不得超過(guò)3μg/kg。

1. 原理

測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原-抗體反應(yīng)。微孔板上包被有抗抗體。加入赭曲霉毒素A（OTA）標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、酶標(biāo)抗原和抗體后，游離的赭曲霉毒素A與酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體，抗體或抗體結(jié)合物與固定在微孔板上的抗抗體再結(jié)合，沒(méi)有結(jié)合的標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)抗原及抗體被洗去，加入TMB底物顯藍(lán)色，加入終止液后顏色由藍(lán)變黃，用酶標(biāo)儀在450nm處檢測(cè)，吸光值與樣品中赭曲霉毒素A含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出赭曲霉毒素A的含量。

 
3. 試劑盒組成

1. 包被有抗抗體的96微孔板：1塊（96孔，12條×8 孔）
2. OTA標(biāo)準(zhǔn)品：0 ppb、0.2 ppb、0.8 ppb、3.0 ppb、10 ppb                    1 瓶 × 1.0mL
3. OTA抗體：                1 瓶 × 10mL
4. OTA酶標(biāo)抗原：            1 瓶 × 10mL
5. 10× 濃縮洗滌液：          1 瓶 × 50mL
6. OTA稀釋緩沖液：          1 瓶 ×50mL
7. 顯色底物液：              1 瓶 ×17mL
8. 反應(yīng)終止液：              1 瓶 × 7mL
9. 試劑盒說(shuō)明書(shū)
10. 質(zhì)檢報(bào)告

1. 需要的儀器、試劑

1）儀器   

1. 酶標(biāo)儀450nm（iELisa全自動(dòng)酶標(biāo)儀或相當(dāng)者）
2. 微量移液器：20μL-200μL單道，100μL-1000μL單道, 50μL-300μL八道
3. 多功能旋轉(zhuǎn)混合器（或者搖床、高速均質(zhì)器）
4. 酶標(biāo)板振蕩器
5. 渦旋混合器
6. 50mL離心管
7. 1.5mL離心管
8. 定性濾紙
9. 過(guò)濾漏斗
10. 天平：感量0.01g

2）試劑

1. 樣品提取液70%甲醇：取700mL甲醇，加300mL純水，混勻。
2. 純水（蒸餾水、去離子水）

8.  注意事項(xiàng)

1. 室溫低于20℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫（20- 25℃）會(huì)導(dǎo)致數(shù)值偏低。
2. 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥過(guò)久的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板排干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3. 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和顯色液對(duì)光敏感，避免直接暴露在光線下。
4. 混合要均勻，洗板要*（包括加樣品和標(biāo)準(zhǔn)液的時(shí)候都必需充分混合均勻）。
5. 反應(yīng)停止液為強(qiáng)酸性物質(zhì)，避免接觸皮膚。
6. 不要使用過(guò)了有效期的試劑盒，也不要稀釋或攙雜使用不同生產(chǎn)廠家的試劑盒這樣會(huì)引起靈敏度降低。
7. 試劑盒的儲(chǔ)存條件是2-8℃，切勿冷凍。

9.  檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度

1. 檢測(cè)限LOD: 谷物1ppb（μg /kg），飼料2.5ppb尿液1.0。（LOD：空白樣品測(cè)定值+2倍標(biāo)準(zhǔn)偏差SD）
2. 定量限LOQ: 谷物2ppb，飼料5ppb,尿液1.5ppb。
3. 定量檢測(cè)范圍：谷物2-50ppb，飼料5-125ppb,飼料1.5-25ppb。