食品中folic acid 葉酸免疫親和柱 IAC-SEP

IAC-SEP®葉酸免疫親和柱

                            （產(chǎn)品編號(hào)：IAC322）   

原理

葉酸免疫親和柱能夠特異性的純化樣品中的葉酸，將樣品與提取液混合、提取、過(guò)濾，然后將濾液通過(guò)免疫親和柱。此時(shí)，葉酸物質(zhì)鍵合在親和柱中的抗體上。用蒸餾水將免疫親合柱上的雜質(zhì)除去。用洗脫液通過(guò)分離柱，將葉酸從抗體上分離下來(lái)。后，將洗脫液注入HPLC或LC-MS進(jìn)行測(cè)定。

儲(chǔ)存條件

該親和柱保存在2-8 °C條件下，不能冷凍，保質(zhì)期為18個(gè)月。建議在室溫（18-30°C）下使用。

實(shí)驗(yàn)溶液制備

        pH7.4 PBS溶液：8.0 克NaCl + 2.90克Na2HPO4 12H2O + 0.24 克 KH2PO4 + 0.2克KCl  加990mL純水溶解，加純水至1升。

     10%抗壞血酸鈉：稱取10g L-抗壞血酸鈉100mL容量瓶中，加水溶解混勻。

      洗脫液（30%乙腈+0.2%三fu乙酸）: 準(zhǔn)確量取30mL乙腈加入到100mL容量瓶中，然后再加入0.2mL 三fu乙酸，后用純水定容至100mL。

所需其他試劑：胰酶（sigma P1750）

液相色譜條件

色譜柱： Agilent-C18,4.6×150mm（5um）

流動(dòng)相：0.1%三fu乙酸：乙腈=85:15（v/v）

流速：0.5 mL/min

檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器，280nm

進(jìn)樣體積：50uL

分析步驟

1） 樣品提取及稀釋：

嬰兒配方食品、嬰兒即食食品、牛奶、奶粉、谷物、能量棒等樣品的操作步驟：稱取 1-10g樣品（根據(jù)需要的檢測(cè)范圍確定稱量多少），置于250 mL錐形瓶中。將50mL pH7.4 PBS溶液加入到錐形瓶中，混勻。加入4g 胰酶，搖床震蕩10分鐘。加入6mL 10%抗壞血酸鈉，搖床震蕩5分鐘。將錐形瓶置于37℃的水浴搖床震蕩2 h。然后將錐形瓶置于100℃的水浴中靜置20min。取出錐形瓶冷卻至室溫；用pH7.4 PBS溶液定容至100mL，搖勻。將提取液4000 RPM離心10 min。準(zhǔn)確移取吸取上層液10 mL，備用。

2） 樣品的凈化

   葉酸免疫親和柱的柱容量(吸附葉酸)為450ng，當(dāng)樣品中葉酸超過(guò)測(cè)定范圍時(shí)，請(qǐng)適當(dāng)減小上柱體積，使其在檢測(cè)范圍內(nèi)，計(jì)算出準(zhǔn)確含量。

食品中folic acid 葉酸免疫親和柱 IAC-SEP