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肺炎衣原體IgM檢測試劑盒的使用步驟介紹
肺炎衣原體IgM檢測試劑盒實驗原理：
將肺炎衣原體包被于微孔板→加入血清,使得抗原抗體結(jié)合→37℃育溫1小時→洗去未結(jié)合的抗體→加入酶結(jié)合物→37℃育溫1小時→洗去酶結(jié)合物→加入底物→加入終止液450nm→讀取吸光值→結(jié)果計算
實驗流程：2×50ul陰性對照、1×50ul陽性對照和稀釋后的樣本加入到微孔板里→37C育溫1小時→洗液洗滌3次→加入50ulHRP酶結(jié)合物→37℃育溫1小時→洗液洗滌3次→加入100ulTMB底物→室溫平衡15分鐘→加入100ul終止液→450nm讀取吸光度→計算結(jié)果
操作步驟：
試劑準備：
1．所有試劑使用前混勻并平衡至室溫。
2．洗液20倍稀釋：如50ul濃縮洗液加入950ml水。酶結(jié)合物1:300稀釋（如10ul加入300ul的稀釋液）。
3．血清樣本1:105稀釋，如加入5ul的血清，加520ul的樣本稀釋液，或者采用兩步法稀釋，加入10ul病人血清，加入200ul樣本稀釋液，取出該稀釋后的溶液25ul，再加入100ul的樣本稀釋液（陰性、陽性和標準品按以上比例稀釋）。
4．每孔加入50ul的稀釋后的液體（空白孔加入樣本稀釋液）。
5．封膜后，37℃育溫1小時，拍干液體。
6．用稀釋后的洗液每孔300-350ul洗滌3次。
7．拍干后加入酶結(jié)合物的稀釋液50ul。
8．封膜后，37℃育溫1小時，拍干液體。
9．重復第6步。
10．加入100ul底物，室溫放置15分鐘。
11．加入終止液100ul。
12．30分鐘內(nèi)檢測450/620nm檢測吸光度。
檢測的有效性：
檢測結(jié)果必須符合下列條件，否則重新測試。
1．陽性對照吸光度值必須≥0.8（450nm讀取吸光度）
2．陰性對照的平均值必須0.1＜NC≤0.4（450nm讀取吸光度）