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抗體特異性選擇技巧分析
閱讀：823 發(fā)布時(shí)間：2023-10-3抗體是哺乳動(dòng)物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對抗病原體的核心，它是在病原體刺激下由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）所分泌的一種免疫球蛋白，能夠識別并結(jié)合特異的病原體抗原，隨后通過介導(dǎo)中和作用、調(diào)理作用、效應(yīng)T細(xì)胞殺傷等來清除病原體
特異性（specificity）的本質(zhì)含義是“Connected with one particular thing only"即只與唯yi的特定事物相關(guān)，具有專一性。在免疫學(xué)上我們會(huì)說“抗體具有特異性"，指的就是抗體具有專一性，某一特定的抗體只能與唯yi 一種抗原結(jié)合。其實(shí)準(zhǔn)確來講是一類具有特定抗原表位的抗原，因?yàn)槟承┎煌目乖哂邢嗤目乖砦唬ǚQ為交叉抗原），也可與同一種抗體特異性結(jié)合?？蒲泄ぷ麟x不開抗體，WB、IP、IHC、IF、ChIP和FC都需要用到抗體，這幾種實(shí)驗(yàn)方法中的抗體特異性選擇需要考慮的要點(diǎn)了解下，特異性的選擇主要需要考慮四個(gè)方面：蛋白特異性、種屬特異性、實(shí)驗(yàn)方法特異性、標(biāo)記物的特異性。
1.蛋白特異性
針對需要檢測的蛋白查找抗體，幾個(gè)細(xì)節(jié)要區(qū)分：
a.重組蛋白如果不是全長表達(dá)，則需要注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。
b.內(nèi)源性蛋白好能清楚其剪切與修飾的方式，特殊表型的蛋白需要進(jìn)行序列比對，并結(jié)合抗體免疫原序列，查看交叉反應(yīng)的情況。
c.磷酸化蛋白檢測需要確定具體位點(diǎn)，不同位點(diǎn)的磷酸化意味著可能有不同的機(jī)制存在，不宜一概而論。
2.種屬特異性
同種蛋白不同物種，有著或大或小的差異。
a. 目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或設(shè)計(jì)多肽抗原的，根據(jù)蛋白的同源性的情況與其他種屬發(fā)生交叉反應(yīng)。需要參照說明書注明的可反應(yīng)種屬信息。
b. 一些稀有種屬很難找到抗體，可以通過蛋白的序列比對，選擇同源序列免疫的抗體，不過一般這種情況商不會(huì)受理其關(guān)于質(zhì)量的申訴，如果可以申請到免費(fèi)的抗體樣品，則利于抗體選擇。
3.實(shí)驗(yàn)方法特異性
目前使用抗體的實(shí)驗(yàn)方法有很多，不同的使用方法過程中，因?yàn)閷Φ鞍讟悠返奶幚矸绞讲灰粯?，蛋白的含量有差異，對抗體的識別表位和效價(jià)要求都是不一樣的。
4.標(biāo)記物的特異性
一般基于實(shí)驗(yàn)操作的實(shí)驗(yàn)方法不會(huì)使用帶有標(biāo)記的一抗，比如 WB、IHC 等，都是通過二抗類的試劑標(biāo)記達(dá)到結(jié)果呈現(xiàn)的目的。但是基于儀器分析的一些實(shí)驗(yàn)，可能就會(huì)使用到直接標(biāo)記的一抗，比如流式實(shí)驗(yàn)。那么需要了解到自己將要使用的儀器能檢測到的熒光范圍，針對不通的參數(shù)要求選擇對應(yīng)的標(biāo)記物。在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中，需要選配不同的熒光標(biāo)記物。