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一、訂購(gòu)

賽爾瑞成提供多種大腸桿菌宿主菌，如需訂購(gòu)，可提供兩種形式的宿主菌供您選擇：穿刺菌和甘油菌，貨期均是2-3天. 

穿刺菌制備方式：將菌種搖瓶活化（對(duì)數(shù)期），預(yù)先在1.5ml的EP管中加入半固體瓊脂培養(yǎng)基，把活化過(guò)的菌種用牙簽穿刺接種于半固體瓊脂培養(yǎng)基中，37℃ 培養(yǎng)一個(gè)晚上即可。

甘油菌制備方式：將菌種搖瓶活化，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，取適量菌液于小管中，加入終濃度為10%-20%的滅菌甘油，混勻后即可，直接置于-80℃保存。

二、運(yùn)輸及保存方式

穿刺菌的運(yùn)輸及保存方式：2-8℃運(yùn)輸，4℃冰箱保存一周。

甘油菌的運(yùn)輸及保存方式：低于0℃運(yùn)輸，-80℃冰箱長(zhǎng)期保存，定期（1年）復(fù)壯。

三、復(fù)蘇

1. 客戶收到穿刺菌后該如何操作？

可先置于4℃保存，盡量不要超過(guò)兩周。
1周內(nèi)從穿刺菌管中挑菌于LB或2YT平板劃線。然后挑取單菌落接種在LB或2YT液體培養(yǎng)基中，待菌液生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期以后，即可取出一定體積的菌液，加入終濃度為10-20%的甘油，就得到了可長(zhǎng)期保存的甘油菌種，可置于-80℃保存?zhèn)溆谩?/span>

具體操作方法：
取一個(gè)滅菌過(guò)的移液器槍頭或接種牙簽，沿著穿刺管中乳白色的大腸桿菌菌體生長(zhǎng)線插入，來(lái)回操作幾次，每次都輕微改變槍頭的方向，以盡可能的增加槍頭與菌體的接觸面。將沾了菌的槍頭或牙簽在LB或2YT平板上劃線。將劃線平板置于37℃培養(yǎng)箱中過(guò)夜培養(yǎng)以長(zhǎng)出單菌落。次日從LB或2YT平板上挑取一個(gè)單菌落接種到LB或2YT液體培養(yǎng)基中，37℃搖床震蕩培養(yǎng)，待菌液生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期以后，即可取出一定體積的菌液，加入終濃度為10-20%的甘油，就得到了可長(zhǎng)期保存的甘油菌種，可置于-80℃保存?zhèn)溆?。剩余菌液可繼續(xù)用于實(shí)驗(yàn)工作。
注：建議挑取兩個(gè)以上單菌落制備長(zhǎng)期保存的菌種。

2. 客戶收到甘油菌后該如何操作？

直接置于-80℃冰箱長(zhǎng)期保存，也可分裝成小份保存。使用之前拿出解凍，搖瓶復(fù)蘇菌種即可。

具體操作方法：
常溫解凍甘油菌（部分解凍即可），取一個(gè)滅菌過(guò)的移液器槍頭或接種牙簽，蘸取甘油菌，在LB或2YT平板上劃線。將平板置于37℃培養(yǎng)箱中過(guò)夜培養(yǎng)以長(zhǎng)出單菌落。次日從LB或2YT平板上挑取一個(gè)單菌落接種到LB或2YT液體培養(yǎng)基中，37℃搖床震蕩培養(yǎng)，即可開(kāi)展后續(xù)實(shí)驗(yàn)工作。
注：建議挑取兩個(gè)以上單菌落制備長(zhǎng)期保存的菌種。

四、注意事項(xiàng)

1. 無(wú)論從穿刺菌還是甘油菌制備菌種，都建議先在LB或2YT平板上劃線，然后挑取一個(gè)新鮮的單菌落于液體培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)。這是為了避免偶然情況下正常菌落中隱藏的突變細(xì)菌或雜菌。如果您只是簡(jiǎn)單的從混合菌落中挑選了一團(tuán)細(xì)菌，然后在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，某些情況下突變的細(xì)菌有可能會(huì)接管整個(gè)培養(yǎng)物成為優(yōu)勢(shì)菌種，從而影響您的實(shí)驗(yàn)。而每個(gè)單獨(dú)的菌落就是單克隆，即它們?cè)谶z傳學(xué)上是相同的因此通過(guò)劃線挑取單克隆的方法可以很好的避免這種問(wèn)題。

2. 在制備長(zhǎng)期保存的菌種時(shí)，建議挑取兩個(gè)以上單菌落制備菌種。

3. 液體菌種制備好以后，應(yīng)直接置于-70℃以下保存，而不要在-20℃或其它溫度保存，否則菌種保存期會(huì)明顯縮短。

4. 有些菌種本身有抗性，或者含有載體的菌種，則需用含有相應(yīng)抗生素的LB或2YT平板或液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，這樣保證偶然摻入的雜菌得到抑制。

附：抗生素使用終濃度
氨芐青霉素(Ampicillin)：100 μg/ml
卡那霉素(Kanamycin)：10-50 μg/ml
氯霉素(Chloramphenicol)：17-34 μg/ml
四環(huán)素(Tetracycline)：5-12.5 μg/ml
鏈霉素(Streptomycin)：50 μg/ml
(根據(jù)質(zhì)?？截悢?shù)的高低，抗生素使用濃度可以適當(dāng)調(diào)整)

賽爾瑞成可提供的大腸桿菌宿主菌列表